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NEBNext® Ultra™II RNA 文库制备试剂盒
NEBNext® Ultra™ II RNA Library Prep Kit for Illumina®
该 Ultra II RNA 文库制备试剂盒专为非定向（非链特异性）RNA 建库设计，可显著提高 RNA 测序实验的灵敏度和特异性，并且可以降低 RNA 的起始用量。若与核糖体 RNA（rRNA）去除或 poly(A) mRNA 富集试剂盒相结合，该试剂盒均可从 10 ng 到 1 µg 的总 RNA 中制备高质量的文库。
特性：
1、文库产量极高，满足更多实验需求
2、即便起始 RNA 量很低，也可制备高质量文库：
10 ng – 1 µg 总 RNA（polyA mRNA 实验流程）
10 ng – 1 µg 总 RNA（rRNA 去除实验流程）
3、通过减少 PCR 循环获得最低的偏嗜性
4、提高文库复杂度和转录本覆盖度
5、通过精简的实验流程、减少的手动操作时间和自动化兼容性优化时间利用稳健可靠的表现
6、与 NEBNext poly(A) mRNA 分离模块、rRNA 去除试剂以及多重测序接头和引物兼容，也提供含 SPRIselect® 磁珠的产品。
图 1：使用 NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒对不同起始量 RNA 进行建库，均能得到最高的文库产量
从人类通用参考 RNA（Agilent #740000）中分离含有 Poly(A) 的 mRNA，并使用 NEBNext Ultra II RNA 试剂盒（加上 NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块）和 Illumina TruSeq RNA 样本制备试剂盒 v2 制备文库。图中显示了 RNA 起始量和 PCR 循环数，也显示了来自三次平行实验的平均文库产量。
图 2：NEBNext Ultra II RNA 与 NEBNext rRNA 去除试剂盒可降低重复率。
使用 NEBNext rRNA 去除试剂盒（人/小鼠/大鼠）或 Illumina Ribo-Zero™ Gold rRNA 去除试剂盒（人/小鼠/大鼠），从 1 μg、100 ng 和 5 ng 人类通用参考 RNA（Agilent #740000）中去除核糖体 RNA。再分别使用 NEBNext Ultra II RNA 试剂盒或 Illumina TruSeq RNA 文库制备试剂盒 v2 制备文库。仅使用 NEBNext 试剂盒测试了 5 ng 的起始量。文库在 Illumina NextSeq® 500 上采用双端模式（2x76 bp）测序。向下抽样 1,000 万个 read，并与 hg19 参考基因组进行比对。使用 RSeQC 的“Read Duplication”工具计算重复率，作为唯一比对 read 计算的一部分，其中比对到相同基因组位置的 read 被视为重复的 read。
图 3：NEBNext Ultra II RNA 文库可在转录本的整个基因体中实现均匀的覆盖度
从人类通用参考 RNA（Agilent #740000）中分离含有 Poly(A) 的 mRNA，并使用 NEBNext Ultra II RNA 试剂盒（加上 NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块）和 Illumina TruSeq RNA 样本制备试剂盒 v2 制备文库。图中显示了 RNA 起始量。文库在 Illumina® NextSeq® 500 上采用双端模式（2x76 bp）测序。RefSeq 转录本 5´ 到 3´ 覆盖度的图像显示，当 RNA 起始量从 1 μg 减少到 10 ng 时，Ultra II RNA 文库的覆盖度仍保持一致。在 TruSeq 试剂盒图中的明显变化是因为部分转录本的 3´ 端失去覆盖度。
图 4：NEBNext Ultra II RNA 文库在低起始量条件下也可保留复杂性
使用 NEBNext rRNA 去除试剂盒（人/小鼠/大鼠）和推荐量的 ERCC RNA Spike-In Mix I（Thermo Fisher Scientific #4456740），从 1 μg、100 ng 和 5 ng 人类通用参考 RNA（Agilent #740000）中去除核糖体 RNA，然后使用 NEBNext Ultra II RNA 试剂盒制备文库。文库在 Illumina NextSeq® 500 上采用双端模式（2x76 bp）测序。使用 Salmon 0.4.0 对所有 ERCC 转录本进行 read 比对和定量分析。图中显示了线性匹配的 R2 值。转录本的 TPM（每千碱基百万转录本）相关性分析表明，Ultra II RNA 文库（A），包括 ERCC 转录本（B）的不同起始量之间均存在出色的转录本表达相关性。
贮存条件：建议贮存于 -20℃。
| 货号 | 产品名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| 744970.5 | NucleoMag NGS 核酸纯化以及片段筛选磁珠 | 5ml | 商城订购 |
| E7335L | NEBNext 多样本接头引物试剂盒 - Illumina（检索引物试剂盒 1） | 96 rxns | 商城订购 |
| M0348S | NEBNext DNA 双链片段化酶 | 50 rxns | 商城订购 |
| 244-PCR-C-0.2-BAG | 0.2ml PCR管 | 1000 个/包 | 商城订购 |
| 4381 | 0.1-2ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 4382 | 0.5-10ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 221-R-C-10S | 0.5-10ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
| 货号 | 名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| E7770S | NEBNext® Ultra™II RNA 文库制备试剂盒 | 24 rxns | 商城订购 |
| E7770L | NEBNext® Ultra™II RNA 文库制备试剂盒 | 96 rxns | 商城订购 |
