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NEBNext DNA 双链片段化酶
NEBNext dsDNA Fragmentase
NEBNext® dsDNA Fragmentase 片段化酶是时间依赖型酶，能根据不同反应时间将双链 DNA（dsDNA）切割成 50 – 1,000 bp DNA 片段。NEBNext dsDNA Fragmentase 片段化酶由 2 种酶组成，一种酶随机的在 dsDNA 上产生切刻，另一种酶识别切刻位点并在切刻点对链进行切割，从而使 dsDNA 产生断裂。生成的 DNA 片段含有短突出末端、5´-磷酸基和 3´-羟基。经过文库制备及测序验证，NEBNext® dsDNA Fragmentase® 片段化酶具有随机切刻活性。比较使用 NEBNext® dsDNA Fragmentase® 片段化酶和使用机械法制备的基因组 DNA 文库，测序结果显示使用 NEBNext® dsDNA Fragmentase® 片段化酶没有偏嗜性，测序覆盖度也无区别。
图 1：大肠杆菌（E. coli）基因组 DNA 的片段化
用 NEBNext dsDNA Fragmentase 片段化酶将大肠杆菌基因组 DNA 在相应的时间内进行片段化，再用 MinElute® 柱纯化。
图 2：片段化
使用 NEBNext® dsDNA Fragmentase® 片段化酶对 5、10 和 20 kb 扩增子进行片段化。
1、反应定义：一次反应是指在 20 µl 反应体系，1X NEBNext dsDNA Fragmentase 片段化酶反应缓冲液 v2 中，37℃条件下，30 分钟内将 1 µg 纯化的 HeLa 细胞基因组 DNA 转化为短（100 – 300 bp）DNA 片段所需 NEBNext® dsDNA Fragmentase® 片段化酶的量。
2、反应条件
1X NEBNext® dsDNA Fragmentase® Reaction Buffer v2
1X NEBNext® dsDNA Fragmentase® Reaction Buffer v2
20 mM Tris-HCl
15 mM MgCl2
50 mM NaCl
0.1 mg/ml BSA
0.15% Triton® X-100
(pH 7.5 @ 25°C)
| 货号 | 产品名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| E6056S | NEBNext 快速连接模块 | 20 rxns | 商城订购 |
| E6050S | NEBNext 末端修复模块 | 20 rxns | 商城订购 |
| 244-PCR-C-0.2-BAG | 0.2ml PCR管 | 1000 个/包 | 商城订购 |
| 4381 | 0.1-2ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 4382 | 0.5-10ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 221-R-C-10S | 0.5-10ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
