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EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶
EnGen® Spy Cas9 NLS
EnGen Spy Cas9 NLS 核酸酶是一种 RNA 介导的核酸内切酶，可催化双链 DNA 的位点特异性切割。该酶可识别 PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列的 NGG 处，并在靶标序列的 3 个碱基内进行切割（1）。PAM 序列的 NGG 必须连在基因编辑靶标位点之后，位于与 sgRNA 序列互补的对链上。EnGen Spy Cas9 NLS 核酸酶蛋白的 N 端和 C 端都含有猴病毒 40（SV40）T 抗原核定位序列（NLS）。
产品特点：
1、直接导入 Cas9/sgRNA 复合物进行基因编辑的理想选择
2、双重核定位序列，提高入核的效率
3、兼容 EnGen® sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes（NEB #E3322S）和 EnGen 突变检测试剂盒
使用 Cas9 RNP 复合物可以提高基因组编辑效率
将靶向特定人源基因的 Cas9 和 sgRNA 转染到 HEK293 细胞。转染所用的质粒 DNA 上含有表达带双端（N 端和 C 端）核定位序列（NLS）的 Cas9 及 sgRNA 的表达框。通过 TransIT-X2（Mirus）转染试剂进行转染。转染所用的 Cas9 mRNA 进行了假尿苷和 5- 甲基胞嘧啶修饰且带有双端（N 端和 C 端）核定位序列（NLS），使用 TransIT-mRNA 转染试剂将 sgRNA 和 mRNA 共转染。Cas9 RNPs 使用脂质体 RNAiMAX（Life Technologies）进行反向转染，RNP 的终浓度为 10 nmol。Cas9 的蛋白序列中不含核定位序列（NLS）。EnGen Cas9 核酸酶蛋白的 N 端和 C 端都含有核定位序列。编辑效率通过 T7 核酸内切酶 I 实验进行分析，结果以修饰百分比进行统计。（图1）
1、反应条件
1X NEBuffer™ r3.1
Incubate at 37°C
2、1X NEBuffer™ r3.1
100 mM NaCl
50 mM Tris-HCl
10 mM MgCl2
100 µg/ml Recombinant Albumin
(pH 7.9 @ 25°C)
3、贮存溶液
300 mM NaCl
10 mM Tris-HCl
0.1 mM EDTA
1 mM DTT
50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C
4、热失活
65°C for 5 minutes
5、注意事项
20 μM 等于 3.22 mg/ml
| 货号 | 产品名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| 221-R-C-10S | 0.5-10ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
| 4382 | 0.5-10ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 4381 | 0.1-2ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 244-PCR-C-0.2-BAG | 0.2ml PCR管 | 1000 个/包 | 商城订购 |
| E3321S | EnGen™ 基因编辑突变检测试剂盒 | 25 rxns | 商城订购 |
| E3322S | EnGen™ sgRNA Synthesis Kit, S. pyogenes | 20 rxns | 商城订购 |
| 货号 | 名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| M0646T | EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 | 500 pmol | 商城订购 |
| M0646M | EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 | 2000 pmol | 商城订购 |
