产品中心
细胞生物学
病理及细胞遗传
单细胞原位空间转录组
固相合成仪
免疫学
细胞生物学
分子生物学
实验室常规
技术交流
扫描二维码
或添加“GeneGroup003”
获取更多更新资讯
商城订购
扫描二维码
或添加“基因商城（GeneMart）”
手机下单，快人一步
售后服务
扫描二维码
或添加“GeneGroup005”
获取更快速售后支持
NEBNext® Ultra™ II Q5® 预混液
NEBNext® Ultra™ II Q5® Master Mix
NEBNext Ultra II Q5® 预混液是 Q5 DNA 聚合酶的最新版本，针对二代测序（NGS）文库扩增的稳定性和保真性做了全面优化。此新剂型进一步提高了文库扩增的一致性，即使在 GC 富集区域依然表现优异。 该预混液的酶是 Q5 超保真聚合酶，它是一个非常新颖的热稳定的 DNA 聚合酶，具有 3´→5´ 核酸外切酶活性，并且融合了具有增强持续合成能力的 Sso7d 结构域。Q5 还具有最优异的保真度（比 Taq DNA 聚合酶高 280 倍），错配率极低。 NEBNext Ultra II Q5 预混液是一种基于适配体的热启动剂型，方便在室温下建立反应体系。便捷的 2X 预混液包含 dNTP、Mg++ 以及专有缓冲液，仅需加入引物和 DNA 模板，即可稳健扩增。所有 NEBNext Ultra II 文库制备试剂盒中均包含 NEBNext Ultra II Q5 预混液，用于 DNA 和 RNA 的建库。
图1：使用人 NA19240 基因组 DNA 为样本制备文库。一个文库没有进行扩增。另外两个文库分别使用 NEBNext Q5 热启动超保真 PCR 预混液（NEB #M0543）或使用 NEBNext Ultra II Q5 预混液（NEB #M0544）进行 5 个循环的 PCR 扩增。文库使用 Illumina® NextSeq® 500 平台进行测序。从每个数据集中随机提取 4.2 亿个 75 bp reads，平均覆盖度为 10X。使用 Bowtie 2.2.4 将 reads 与 GRCh37 参考基因进行比对。使用 bedtools v2.19.1 统计每个区域的 reads。
A：图片展示了每个文库在人基因组不同低覆盖度区域（1）的 reads数。
B：从每个数据集随机提取 4.2 亿个 75 bp reads，预计有 10X 的预测深度。图片显示了 > 10X 深度下每个文库在困难区域的覆盖度百分比。NEBNext Ultra II Q5 预混液提高了这些已知低覆盖度区域的覆盖度（没有缺失），并显示出与未扩增样品相似的覆盖度。
图2：按照生产商推荐的方法，使用 PCR-free 方法或所示的文库制备试剂盒，以 100 ng 人 NA19240 基因组 DNA 为样本制备文库。使用 NEBNext Ultra II 制备 PCR-free 文库。文库使用 Illumina NextSeq® 500 平台进行测序。从每个数据集中随机提取 4.2 亿个 reads，平均覆盖度为 10X。使用 Bowtie 2.2.4 将 reads 与 GRCh37 参考基因进行比对。使用 bedtools v2.19.1 统计每个区域的 reads。图片展示了每个文库在人基因组不同低覆盖度区域（1）的 reads数。Ultra II 可在这些困难区域实现最高且最均匀的覆盖度，让覆盖度更接近使用 PCR-free 方法所获取的覆盖度。
图3：以所示的 100 ng 基因组 DNA 为样本，使用 NEBNext Ultra II DNA 文库制备试剂盒进行文库制备。使用 NEBNext Ultra II Q5 预混液模块进行扩增，并在 Illumina MiSeq 平台进行测序。使用 Picard 的 CollectGCBiasMetrics（v1.117）计算 GC 覆盖度信息。水平灰线表示预期标准化覆盖度（1.0），垂直灰柱表示每 100 bp 区域的 GC 含量（%），彩色折线表示每个文库的标准化覆盖度。不论 DNA 的 GC 含量如何，NEBNext Ultra II Q5 预混液都能获得均一的 GC 覆盖度。
1、反应条件
NEBNext Ultra II Q5 预混液、 DNA 模板和 1 μM 引物，总反应体积为 50 μl。
2、贮存条件
建议贮存于 -20℃。
| 货号 | 产品名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| 744970.5 | NucleoMag NGS 核酸纯化以及片段筛选磁珠 | 5ml | 商城订购 |
| E7335L | NEBNext 多样本接头引物试剂盒 - Illumina（检索引物试剂盒 1） | 96 rxns | 商城订购 |
| M0348S | NEBNext DNA 双链片段化酶 | 50 rxns | 商城订购 |
| 244-PCR-C-0.2-BAG | 0.2ml PCR管 | 1000 个/包 | 商城订购 |
| 4381 | 0.1-2ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 4382 | 0.5-10ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 221-R-C-10S | 0.5-10ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
| 货号 | 名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| M0544S | NEBNext® Ultra™ II Q5® 预混液 | 50 rxns | 商城订购 |
| M0544L | NEBNext® Ultra™ II Q5® 预混液 | 250 rxns | 商城订购 |
