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Gibson 组装预混液

Gibson Assembly Master Mix

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Gibson 组装法由 J. Craig Venter 研究所的 Daniel Gibson 博士及其同事发明,由 Synthetic Genomics 公司授权予 NEB 许可。不管片段的长短和末端匹配性如何,该方法都可以成功组装多个 DNA 片段。对于较大的 DNA 构建体而言,该方法易用、灵活、适用性强,因此已被合成生物学领域广泛采用。


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Gibson 组装可在等温条件下,单管反应实现多个带重叠末端的 DNA 片段的组装(1,2)。Gibson 组装预混液在同一反应缓冲液中有三种不同的酶活性。不管片段的长短和末端匹配性如何,Gibson 组装法都可以成功组装多个 DNA 片段。


最终形成双链闭合的 DNA 分子,可作为 PCR、RCA 的模板或其它分子生物学应用,包括直接转化。Gibson 的团队和其他研究者们已成功使用该方法组装寡核苷酸、具有多个重叠的 DNA(15–80 bp)以及数百 kb 长的片段(1–2)。


产品优势:

1、增加组装产物的成功率,尤其是组装较大或数量较多的片段;

2、灵活的序列设计(无缝克隆);

3、无需纯化步骤;

4、一小时内即可完成复杂组装;

5、可立即将 DNA 用于转化,或将 DNA 作为 PCR 或 RCA 的模板;

6、适用性强,适用于各种 DNA 改造,包括定点突变、插入和缺失。


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1、规格:10 μl 2X Gibson 组装预混液和 6 个片段(5 个片段为 400 bp,1 个片段为 2,780 bp,重叠为 40 bp,每个 0.05 pmol),在 20 μl 反应体系,50℃ 温育 60 分钟。根据转化操作流程,取 2 μl 预混液/片段混合物转化 NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞(NEB #C2987)。在含 IPTG/Xgal 的氨苄青霉素抗性平板上涂布 1/10 的复苏菌液并温育过夜,能观测到 100 个以上白色菌落。

2、在-20°C下储存。解冻,使用前彻底涡旋,并保持在冰上。


货号 产品名称 单位 购买
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244-PCR-C-0.2-BAG 0.2ml PCR管 1000 个/包 商城订购
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货号 名称 单位 购买
E2611L Gibson 组装预混液 50 rxns 商城订购
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