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Gibson 组装预混液
Gibson Assembly Master Mix
Gibson 组装法由 J. Craig Venter 研究所的 Daniel Gibson 博士及其同事发明,由 Synthetic Genomics 公司授权予 NEB 许可。不管片段的长短和末端匹配性如何,该方法都可以成功组装多个 DNA 片段。对于较大的 DNA 构建体而言,该方法易用、灵活、适用性强,因此已被合成生物学领域广泛采用。

Gibson 组装可在等温条件下,单管反应实现多个带重叠末端的 DNA 片段的组装(1,2)。Gibson 组装预混液在同一反应缓冲液中有三种不同的酶活性。不管片段的长短和末端匹配性如何,Gibson 组装法都可以成功组装多个 DNA 片段。
最终形成双链闭合的 DNA 分子,可作为 PCR、RCA 的模板或其它分子生物学应用,包括直接转化。Gibson 的团队和其他研究者们已成功使用该方法组装寡核苷酸、具有多个重叠的 DNA(15–80 bp)以及数百 kb 长的片段(1–2)。
产品优势:
1、增加组装产物的成功率,尤其是组装较大或数量较多的片段;
2、灵活的序列设计(无缝克隆);
3、无需纯化步骤;
4、一小时内即可完成复杂组装;
5、可立即将 DNA 用于转化,或将 DNA 作为 PCR 或 RCA 的模板;
6、适用性强,适用于各种 DNA 改造,包括定点突变、插入和缺失。

1、规格:10 μl 2X Gibson 组装预混液和 6 个片段(5 个片段为 400 bp,1 个片段为 2,780 bp,重叠为 40 bp,每个 0.05 pmol),在 20 μl 反应体系,50℃ 温育 60 分钟。根据转化操作流程,取 2 μl 预混液/片段混合物转化 NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞(NEB #C2987)。在含 IPTG/Xgal 的氨苄青霉素抗性平板上涂布 1/10 的复苏菌液并温育过夜,能观测到 100 个以上白色菌落。
2、在-20°C下储存。解冻,使用前彻底涡旋,并保持在冰上。
| 货号 | 产品名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| 243-MCT-C-2.0 | 2.0ml微量离心管 | 500 个/盒,10 盒/箱 | 商城订购 |
| 244-PCR-C-0.2-BAG | 0.2ml PCR管 | 1000 个/包 | 商城订购 |
| SI-0246 | Vortex-Genie2 多功能漩涡振荡器 | 1 set | 商城订购 |
| 244-PCR-C-0.2-BAG | 0.2ml PCR管 | 1000 个/包 | 商城订购 |
| 221-R-C-10S | 0.5-10ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒,10盒/组,5组/箱 | 商城订购 |
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