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NEB® Golden Gate组装试剂盒(BsaI-HF®v2)
NEB® Golden Gate Assembly Kit (BsaI-HF®v2)100 rxns
NEBridge Golden Gate 组装试剂盒（BsaI-HFv2）内含优化的 BsaI-HFv2 和 T4 DNA 连接酶的混合液。利用 Golden Gate 方法，混合液可以完成多个片段/模块的组装。试剂盒还随附目的质粒 pGGAselect，为组装提供骨架，同时为亚克隆提供内切酶酶切位点，以及为体外转录提供 T7/SP6 启动子序列。
Golden Gate 组装技术（图1,2）可高效、无痕地克隆组装 DNA 片段。该技术起源于 1996 年，当时是第一次使用单一的 IIS 型限制性内切酶和 T4 DNA 连接酶依次（图3）或同时（图4）将多个目的基因插入到同一个载体骨架上。
IIS 型限制性内切酶结合于识别位点，却在识别位点的下游特定位置进行切割，切割位点是位置特异的，而非序列特异的。这样，单个 IIS 型限制性内切酶可用于产生具有特定突出末端的 DNA 片段。例如，BsaI 的识别位点为 GGTCTC（N1/N5），其中 GGTCTC 是识别和结合位点，而 N1/N5 表示切割位点位于上链的第一个碱基后，下链的第五个碱基后。片段的连接是通过酶切产生的 4 个碱基突出端互补而形成。酶切后的片段及最终组装产物不再含有 IIS 型限制性内切酶识别位点，所以不可能进一步发生酶切。 组装产物随时间逐渐积累。
该方法特别适用于多重组装实验，例如 TALEs（Transcription Activator Like Effectors，转录激活因子样效应物）（5），以及 TALENs（TALE 与 FokI 核酸酶催化结构域融合表达）（6）。Golden Gate 方法也适用于单一目的基因的克隆实验以及不同来源基因的文库构建。观看此视频教程，了解更多 Golden Gate 组装工作流程。
产品优势：
1、无缝克隆 – 组装后无额外碱基存在
2、单次反应即可按顺序组装多个片段
3、也可用于单个片段克隆
4、有效组装高 GC 区和重复区
5、兼容片段长度广（< 100 bp to > 15 kb）
图 1：概述：Golden Gate 组装的操作流程
图 2：Golden Gate 工作流程
简单来说，Golden Gate 组装需要 IIS 型内切酶识别位点，在本示例中，BsaI-HFv2 识别序列（GGTCTC）加在 dsDNA 片段双侧末端。酶切后，识别位点不再存在，每个片段产生 4 个碱基突出末端，用于引导组装。
图 3：可高效精确地实现 24 个片段的 Golden Gate 组装
遵循本文推荐的循环步骤，在含有 lacI/lacZ 的表达框中组装 24 个片段。虽然 30 个循环足以实现 24 个片段组装，但 BsaI-HFv2 和 T4 DNA 连接酶的稳定性允许连续进行 45 和 60 个循环的组装且背景低。（a）组装效率和（b）组装准确性与循环次数的关系如图所示。
图 4：pGGA 是一个大小为 2,200 bp 的克隆载体，可用于 Golden Gate 组装。该质粒含有两个 BsaI 位点；用 BsaI 酶切会释放 87 bp 的片段和 2,133 bp 的载体骨架片段，可接收插入片段或组装片段。
1、试剂盒成分：T4 DNA Ligase Reaction Buffer；NEB Golden Gate Assembly Mix；pGGA Destination Plasmid
2、储存温度：-20°C
3、2 年保质期
| 货号 | 产品名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| 221-R-B-1000s | 100-1000ul 盒装灭菌吸头 | 96 支/盒，10 盒/组，5 组/箱 | 商城订购 |
| 221-R-Y-200S | 10-200ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
| 243-MCT-C-1.5 | 1.5ml微量离心管 | 500 个/盒，10 盒/箱 | 商城订购 |
| 221-R-C-10S | 0.5-10ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
| 货号 | 名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| E1601S | NEB® Golden Gate组装试剂盒(BsaI-HF®v2) | 20次 | 商城订购 |
| E1601L | NEB® Golden Gate组装试剂盒(BsaI-HF®v2) | 100次 | 商城订购 |
