技术交流
扫描二维码
或添加“GeneGroup003”
获取更多更新资讯
商城订购
扫描二维码
或添加“基因商城（GeneMart）”
手机下单，快人一步
售后服务
扫描二维码
或添加“GeneGroup005”
获取更快速售后支持
NEBNext® Ultra™ II FS DNA 文库制备试剂盒 - 含片段化酶
NEBNext® Ultra™ II FS DNA Library Prep Kit for Illumina
NEBNext® Ultra™ II FS DNA 文库制备试剂盒 - 含片段化酶提供片段化系统：为 DNA 片段化和建库提供快速可靠的解决方案。全新的 DNA 片段化试剂，将 DNA 片段化、末端修复和加 dA 尾优化到一步，可在单管中完成，省去了繁琐的纯化步骤，防止样品损失。无论起始量（100 pg – 500 ng）或 GC 含量如何，均可采用相同的片段化操作流程。该试剂盒还包含：适用于接头连接的 NEBNext Ultra II 连接酶预混液；用于实现均一的、超保真文库扩增的 NEBNext Ultra II Q5® 预混液。请注意，接头和引物未随试剂盒提供，须单独购买。
特性：
1、使用同一种酶混合物即可完成 DNA 片段化、末端修复和加 dA 尾三个步骤
2、不同起始量或 GC 含量的 DNA 样本，均可使用相同的片段化操作流程
3、DNA 起始量范围：100 pg – 500 ng
4、起始 DNA 可溶于水或标准缓冲液（Tris 或 TE）
5、工作流程：全程约 2.5 小时，实际手动操作时间 < 15 分钟
图 1：使用 NEBNext Ultra II FS DNA 文库制备试剂盒对不同起始量 DNA 进行建库，均能得到最高的文库产量
使用人 NA19240 基因组 DNA 为样本制备文库，起始量和 PCR 循环次数如图所示。使用 NEBNext Ultra II FS 建库时，进行 20 分钟的片段化。使用 Kapa™ HyperPlus 建库时，根据生产商建议，建库前先采用 3X 磁珠对 DNA 进行纯化，再进行 20 分钟的片段化。由于 Illumina® 仅推荐 Nextera 产品使用 50 ng 起始量，而非划定起始量范围；因此在本实验中仅使用 50 ng。采用“Covaris®”仪器在 1X TE 缓冲液中将起始 DNA 打断至 200 bp，然后使用 NEBNext Ultra II DNA 文库制备试剂盒（NEB #E7645）建库。误差条表示由 2 个用户操作的 3 – 6 次重复的平均标准偏差。
图 2：对于不同的起始量，使用 NEBNext Ultra II FS DNA 文库制备试剂盒均能提供大小一致的片段
使用人 NA19240 基因组 DNA 为样本制备文库，起始量如图所示。使用 NEBNext Ultra II FS 建库时，进行 20 分钟的片段化。使用 Kapa™ HyperPlus 建库时，根据生产商建议，建库前先采用 3X 磁珠对 DNA 进行纯化，再进行 20 分钟的片段化。使用 Agilent® Bioanalyzer® 评估建库产量。低起始量（1 ng 及以下）的文库无需稀释，即可上样到 Bioanalyzer 上。高起始量的文库在 0.1X TE 中以 1:5 稀释后再上样。
图 3：对于不同 GC 含量的微生物基因组 DNA，NEBNext Ultra II FS DNA 文库制备试剂盒能获得均一的 GC 覆盖度
以 1 ng 的流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae）、大肠杆菌（Escherichia coli）（K-12 MG1655）、沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas palustris）的混合基因组 DNA 为样本制备文库，使用 9 个 PCR 循环进行扩增，文库使用 Illumina MiSeq® 进行测序，所用的建库试剂盒如图所示。使用 NEBNext Ultra II FS 建库时，进行 20 分钟的片段化。使用 Kapa HyperPlus 建库时，根据生产商建议，建库前先采用 3X 磁珠对 DNA 进行纯化，再进行 25 分钟的片段化。采用“Covaris”仪器在 1X TE 缓冲液中将起始 1 ng DNA 打断至 200 bp，然后使用 NEBNext Ultra II DNA 文库制备试剂盒（NEB #E7645）建库。使用 Bowtie 2.2.4 比对 reads，并使用 Picard’s CollectGCBiasMetrics（v1.117）计算 GC 覆盖度。预期的标准覆盖度 1.0 以灰色的水平线表示，不同的 GC% 中 100 bp 区域的数量以灰色条形图显示，彩色折线表示标准化后的文库覆盖度。
图 4：使用 ULTRA II FS DNA 文库制备试剂盒获得的 DNA 文库产量比其他方法多 10 - 15 倍，数据来自 Wellcome Trust Sanger Institute 的 Peter Ellis
以人类基因组 DNA 为样本，分别使用现有的 DNA 建库工作流程（CURRENT）、NEB Ultra II 和 NEB Ultra II FS 文库制备试剂盒进行 DNA 建库。将已连接接头的文库经过 PCR（4 - 12 个循环）扩增，纯化后使用 Agilent Bioanalyzer 平台进行定量。DNA 文库产量的标准数值为经过 12 个 PCR 循环扩增获得。
贮存条件：建议贮存于 -20℃。
| 货号 | 产品名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| 244-PCR-C-0.2-BAG | 0.2ml PCR管 | 1000 个/包 | 商城订购 |
| 4381 | 0.1-2ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 4382 | 0.5-10ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 221-R-C-10S | 0.5-10ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
| B6118S | NEBNext® Library 稀释液, 2X7.5ml | 2X7.5ml | 商城订购 |
| E7630S | NEBNext® 文库定量试剂盒 | 100 rxns | 商城订购 |
