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Luna® 通用探针法 qPCR 预混液
Luna® Universal Probe qPCR Master Mix
探针法定量 PCR（qPCR）原理是利用聚合酶的 5´→3´ 核酸外切酶活性，将淬灭的靶基因特异性探针切断，使其发出荧光，并实时监测释放出的荧光，以测量每个 PCR 循环中的 DNA 扩增。通过检测荧光信号显著超过本底信号时的循环数，可确定 Cq 值。Cq 值可用于评估评估两个或两个以上的样本之间的相对丰度，也通过梯度稀释已知浓度样品所绘制的标准曲线，对样本绝对定量。
Luna 通用探针法 qPCR 预混液是经优化的 2X 反应预混液，适用于水解探针法对靶标 DNA 序列进行实时 qPCR 检测和定量分析。该预混液包含热启动 Taq DNA 聚合酶，还添加了独特的惰性参比染料，该染料可与多种 qPCR 仪器兼容（包括需要高 ROX 或低 ROX 参比信号的仪器）。独具特色的是：预混液还包含可防止交叉污染的 dUTP，以及有助于观察反应体系建立的非荧光可见示踪染料。该染料的光谱与 qPCR 荧光染料不重叠，因此不会影响到实时检测数值。 该预混液浓度为 2X，包含 DNA 扩增和定量所需的所有 PCR 组分（引物/探针和 DNA 模板除外）。使用 Luna qPCR 试剂配合商品化的 qPCR 检测引物/探针，可以对基因组 DNA 或感兴趣的 cDNA 进行定量。
图 1：Luna 通用探针法 qPCR 预混液具有更高的灵敏度、更出众的可重复性以及更优异的 RT-qPCR 表现 使用 Luna 通用探针法 qPCR 预混液，检测目标中 GAPDH 基因的表达情况，模板为 6个 10 倍稀释的 Jurkat cDNA (20 ng - 0.2 pg),每个浓度的样品做 8 个复孔。cDNA 是以 Jurkat 的总 RNA 为模板，使用 Protoscript® II cDNA 第一链合成试剂盒（NEB #E6560）反转录获得。
图 2：Luna 通用探针法 qPCR 预混液在多重检测应用中展现强大功效 使用 Luna 通用探针法 qPCR 预混液对人 GAPDH、核糖体蛋白 L32g 和与 PI-3-激酶相关的激酶 SMG1 进行单重（左）和多重（右）qPCR 检测，模板上样量为 5 个 10 倍梯度稀释浓度（20 ng - 2 pg Jurkat cDNA），每个浓度的样品做 4 个复孔。在多重 qPCR（可解释拷贝数差异）和单重 qPCR（可进行直接对比）检测中，低拷贝的模板（SMG1）使用的引物浓度为 0.4 µM，高拷贝的模板（L32g 和 GAPDH）使用的引物浓度为 0.2 µM。
图 3：通过与市售的探针法 qPCR 试剂相比，Luna 产品展现出更好的稳定性和特异性 使用 NEB 和其它品牌的 qPCR 试剂对 10 个不同丰度、长度和 GC 含量的目的基因进行 qPCR 测试，以 Jurkat 基因组 DNA 或从 Jurkat 获得的 cDNA 作为模板（每种 5 个目的基因）。每份检测结果由两个实验者根据厂商操作说明获得。从以下方面评估了测试结果：扩增效率、痕量样本检测能力及无模板扩增值（ΔCq = 无模板对照的平均 Cq – 最低起始量的平均 Cq）。此外，一致性、可重复性以及曲线的整体质量评估也作为实验的参考（质量分数）。柱状图展示了符合可接受的性能标准的百分比（由点图上的绿色框表示，质量分数 > 3）。NEB 和其它品牌测试结果如下：QIAGEN，QuantiTect® Probe PCR Kit；Bio-Rad, SsoAdvanced™ Universal Probes Supermix；Roche，FastStart® TaqMan® Probe Master；ABI，TaqMan Fast Advanced Master Mix；Promega®，GoTaq® Probe qPCR Master Mix。Luna 通用探针法 qPCR 预混液性能优于其它测试试剂。
图 4：Luna 通用探针法 qPCR 预混液包含惰性蓝色示踪染料，可避免加样错误。
贮存条件：
建议贮存于 -20℃。
| 货号 | 产品名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| 243-MCT-C-2.0 | 2.0ml微量离心管 | 500 个/盒，10 盒/箱 | 商城订购 |
| 221-R-C-10S | 0.5-10ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
| 4382 | 0.5-10ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 4381 | 0.1-2ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 244-PCR-C-0.2-BAG | 0.2ml PCR管 | 1000 个/包 | 商城订购 |
| 267-PLT-C-96 | 0.2 ml 96孔无裙边 PCR板 | 10 板/包，5 包/箱 | 商城订购 |
| 货号 | 名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| M3004V | Luna® 通用探针法 qPCR 预混液 | 100 rxns | 商城订购 |
| M3004S | Luna® 通用探针法 qPCR 预混液 | 200 rxns | 商城订购 |
| M3004L | Luna® 通用探针法 qPCR 预混液 | 500 rxns | 商城订购 |
| M3004X | Luna® 通用探针法 qPCR 预混液 | 1000 rxns | 商城订购 |
| M3004E | Luna® 通用探针法 qPCR 预混液 | 2500 rxns | 商城订购 |
