产品中心
细胞生物学
病理及细胞遗传
单细胞原位空间转录组
固相合成仪
免疫学
细胞生物学
分子生物学
实验室常规
技术交流
扫描二维码
或添加“GeneGroup003”
获取更多更新资讯
商城订购
扫描二维码
或添加“基因商城（GeneMart）”
手机下单，快人一步
售后服务
扫描二维码
或添加“GeneGroup005”
获取更快速售后支持
mRNA 帽结构 2´ -O-甲基转移酶
mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase
mRNA 帽结构 2´-O-甲基转移酶能在 RNA 5´ 末端紧邻帽结构的第一个核苷酸的 2´-O 上添加甲基基团。该酶利用 S-腺苷甲硫氨酸（SAM）作为甲基供体，使带帽 Cap 0 甲基化为 Cap 1。
近期有研究显示，Cap 1 结构中的 2′-O-甲基化有助于 mRNA 逃避某些体内细胞类型中的先天免疫反应（1,2）。
mRNA 帽结构 2´-O-甲基转移酶特异性地以具有 m7GpppN 帽结构的 RNA 作为底物。该酶无法催化 5´ 末端具有 pN、ppN、pppN 或 GpppN 的 RNA（3,4）。加帽的 RNA 可通过使用帽类似物体外转录制备，也可通过使用牛痘病毒加帽酶（NEB #M2080）的酶促加帽制备。
1、单位定义
1 单位指在 37℃ 条件下，1 小时内将 10 pmol 80 nt 的带帽 RNA 转录物甲基化所需的酶量。
2、反应条件
1X 加帽缓冲液
Supplement with 0.2 mM S-腺苷甲硫氨酸（SAM）
Incubate at 37°C
1X 加帽缓冲液
50 mM Tris-HCl
5 mM KCl
1 mM MgCl2
1 mM DTT
(pH 8 @ 25°C)
3、贮存溶液
20 mM Tris-HCl
100 mM NaCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% Glycerol
0.1% (w/v) Triton® X-100
pH 8 @ 25°C
4、贮存条件:建议贮存于 -20℃。
5、注意事项（建立反应体系前请仔细阅读）
（1）体外转录和帽类似物制备的 RNA，使用前应进行纯化，并将 RNA 重悬于无核酸酶水中。溶液中不应存在 EDTA 和盐。
mRNA 帽结构 2´-O-甲基转移酶可直接加入牛痘病毒加帽系统（NEB #M2080）反应中。此时无需纯化 RNA。
（2）在与酶温育前，将 RNA 在 65℃ 条件下加热 5 分钟以去除转录本 5´ 末端的二级结构。对于已知 5´ 末端高度结构化的转录本，可将时间延长至 10 分钟。
（3）SAM 在 pH 值为 7–8 和 37℃ 条件下不稳定，请在开始反应前配置新鲜混合液。建议首先确定要建立的反应次数，然后在快要建立反应体系时将 32 mM 贮存液分装稀释至 4 mM。请将该“工作原液”放置于冰上，防止 SAM 降解。
| 货号 | 产品名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| SI-0246 | Vortex-Genie2 多功能漩涡振荡器 | 1 set | 商城订购 |
| 244-PCR-C-0.2-BAG | 0.2ml PCR管 | 1000 个/包 | 商城订购 |
| 4381 | 0.1-2ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 4382 | 0.5-10ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 221-R-C-10S | 0.5-10ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
