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小鼠 RNase 抑制剂

RNase Inhibitor, Murine

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小鼠 RNase 抑制剂是鼠源重组蛋白,分子量为 50 kDa。该抑制剂可以特异性抑制 RNase A、B 和 C 活性,它与 RNase 以 1:1 的比例高效非共价结合从而抑制其活性。但对 RNase 1、RNase T1、S1 核酸酶、RNase H 或来源于曲霉属(Aspergillus)的 RNase 无效。此外,与下列聚合酶共同使用时,该抑制剂不会抑制聚合酶的活性,如:Taq DNA 聚合酶、AMV 或 M-MuLV 反转录酶或噬菌体 RNA 聚合酶(SP6、T7 或 T3)。


重组小鼠 RNase 抑制剂不含半胱氨酸。已证实,人源 RNase 抑制剂中的半胱氨酸能导致抑制剂对氧化敏感甚至失活(1)。因此,小鼠 RNase 抑制剂与人/猪 RNase 抑制剂相比,抗氧化能力显著提高,且在 DTT 浓度较低(<1 mM)时也很稳定。这使其在不适宜高浓度 DTT 的反应中更具优势(如: RT-PCR)。


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1、单位定义

1 单位指能抑制 5 ng RNase A 50%活性所需的小鼠 RNase 抑制剂的量。活性测定是通过抑制 RNase A 对胞嘧啶 2´,3´ -环单磷酸盐的水解来进行。

2、贮存溶液

20 mM HEPES-KOH

50 mM KCl

8 mM DTT

50% Glycerol

pH 7.6 @ 25°C

3、贮存条件:建议贮存于 -20℃。

4、注意:

(1)由于核糖核酸酶在变性条件下仍能保持活性,因此必须注意避免已与核糖核酸酶形成复合物的 RNase 抑制剂分子变性。为防止活性核糖核酸酶的释放,应避免反应温度超过 50℃和应用高浓度的尿素或其它变性剂。

(2)反应中建议 RNase 抑制剂的浓度为 1 unit/μl。在建立反应时,RNase 抑制剂应先于其它可能作为 RNase 污染源的组份(如:酶、小提的质粒)加入到反应中。


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