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E. coli Poly(A) 聚合酶
E. coli Poly(A) Polymerase
Poly(A) 聚合酶催化由 ATP 转化成的 AMP 添加到 RNA 3´ 端，该反应不依赖模板的存在。
图 1：带帽和 Poly(A) 尾的 RNA 的分析
A. 使用 Agilent Bioanalyzer® 对带帽和 Poly(A) 尾的 RNA 进行分析。通过提高反应中酶的浓度来产生较长的尾。计算每条泳道上显示出的 A 尾长度。泳道：L：分子量 marker，1：无 poly-A 尾，2：5 个单位，3：15 个单位，4：25 个单位的 E. coli Poly(A) 聚合酶。
B. 酶促加 A 尾对 CLuc mRNA 荧光素酶报告基因活性的影响
1、单位定义
1 单位指 20 µl 反应体系中，37℃ 条件下，10 分钟催化 1 nmol 的 AMP 掺入 RNA 所需要的酶量。
2、反应条件
1X Poly(A) 聚合酶反应缓冲液
Supplement with 1 mM ATP
Incubate at 37°C
1X Poly(A) 聚合酶反应缓冲液
50 mM Tris-HCl
250 mM NaCl
10 mM MgCl2
(pH 8.1 @ 25°C)
3、贮存溶液
20 mM Tris-HCl
300 mM NaCl
1 mM DTT
1 mM EDTA
50% Glycerol
0.1% (w/v) Triton® X-100
pH 7.5 @ 25°C
4、单位活性检测条件
20 µl 总反应体系，含 1X Poly(A) 聚合酶反应缓冲液、1 mM rATP 和 500 ng 5´ FAM 标记的 poly A 20-mer RNA。37℃ 温育 10 分钟后，通过凝胶电泳或自动毛细管电泳 DNA 测序仪确定 poly(A) 添加的长度。在该测定中，5 个单位的酶催化大约 60 到 80 个腺苷掺入 RNA 引物。在这些条件下，20 个单位的酶将耗尽 rATP。
5、贮存条件:建议贮存于 -20℃。
6、注意事项：提供的缓冲液不含 rATP。
| 货号 | 产品名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| N0466S | rNTP 混合液 | 10 μmol of each | 商城订购 |
| 244-PCR-C-0.2-BAG | 0.2ml PCR管 | 1000 个/包 | 商城订购 |
| 4381 | 0.1-2ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 4382 | 0.5-10ul单道移液器 | 1 unit | 商城订购 |
| 221-R-C-10S | 0.5-10ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
| N0450S | rNTP 套装 | 10 μmol of each | 商城订购 |
