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NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统

NEBExpress® MBP Fusion and Purification System

产品概述 技术指标 配套产品 订购信息 精彩视频 相关资料
在 NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统中，pMAL-c6T 载体提供了一种将克隆基因或开放阅读框编码的蛋白质表达和纯化的方法。首先，将目标克隆基因插入大肠杆菌编码麦芽糖结合蛋白（MBP）的 malE 基因框架下游；这样构建的载体可表达 MBP 融合蛋白。pMAL-c6T 载体表达 N 端标记六组氨酸的 malE 基因（缺少分泌信号序列，并且经改造可以与直链淀粉更紧密地结合），其后是 TEV 蛋白酶识别序列、多克隆酶切位点和三位终止密码子。pMAL-c6T 载体在细胞质中表达 MBP 融合蛋白。这种方法使用“tac”强启动子和 malE 翻译起始信号，从而能够使克隆序列进行高水平表达。然后，利用 MBP 与麦芽糖的亲和特性，使用直链淀粉树脂对融合蛋白进行一步纯化。 直链淀粉纯化后，可以使用 TEV 蛋白酶将 MBP 标签从目标蛋白上切下来，目标蛋白不残留任何载体衍生基团。MBP 标签和 TEV 蛋白酶均带有 His 标签，因此可轻松从反应中去除。将上述反应产物经 NEBExpress 镍柱填料（NEB＃S1428）分离，可去除 MBP 标签和 TEV 蛋白酶，从而在收集管液中可获得目标蛋白。目标蛋白产量更高可达 100 mg/L，一般产量为 10–40 mg/L。
产量：更高100 mg/L，一般产量为 10–40 mg/L；成分：pMAL-c6T DNA，Amylose Resin，TEV Protease，TEV Protease Reaction Buffer，10 X，Anti-MBP Monoclonal Antibody，MBP6 Protein， MBP6-TEV-Paramyosin Δsal，E. coli ER2523 (NEB Express) (Glycerol Stock)。
货号 产品名称 单位 购买
E2621L NEBuilder® 高保真 DNA 组装预混液 50 rxns 商城订购
B7703S 蛋白电泳上样缓冲液套装（含溴酚蓝） 8 ml 商城订购
P7717S 非预染蛋白 Standard，宽范围(10-200 kDa) 150 gel lanes 商城订购
货号 名称 单位 购买
E8201S NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统 1 组 商城订购
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