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高保真限制性内切酶BsaI-HF®v2
BsaI-HF®v2
高保真（HF®）限制性内切酶具有与天然酶相同的特异性，但经过改造后显著降低星号活性，并使用统一的缓冲液（rCutSmart™ 缓冲液）。所有 HF 限制性内切酶均随附 6X 紫色凝胶上样染料。经过改造的内切酶与天然内切酶相比较，虽然价格相同，但性能和性价比更高。
1、为提高性能进行基因工程改造
2、用于 Golden Gate 组装；在常用于此用途的 T4 DNA 连接酶缓冲液中保持高活性水平
3、IIS 型限制性内切酶能识别非回文 DNA 序列，并在识别序列之外进行切割
4、在 rCutSmart 缓冲液中具有 100% 活性
5、符合省时酶（Time-Saver™）标准，可在 5-15 分钟内完成酶切
6、降低星号活性
7、NEB 开发了便捷的 Golden Gate 组装试剂盒（使用 BsmBI-v2 和 BsaI-HFv2）
8、限制性内切酶酶切位点：GGTCTC(1/5)
Golden Gate 组装过程中对 DNA 酶切的要求比传统 DNA 克隆更为严苛。用于 Golden Gate 组装的限制性内切酶必须可以在酶的非最适缓冲液中反应良好，并在动态的酶切/重新连接反应中，在内切酶与连接酶竞争性结合底物的前提下，在更高的反应温度下，延长酶切时间，仍然拥有活性。大量测试表明，在具有挑战性的 Golden Gate 组装实验（限制性内切酶酶切效率和保真性至关重要）中，相较于 BsaI（NEB #R0535）和 BsaI-HF（NEB #R3535），BsaI-HFv2 的性能更优越。
1、单位定义
一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内酶切 1 µg pXba DNA 所需的酶量。
2、反应条件
1X rCutSmart™ 缓冲液
Incubate at 37°C
1X rCutSmart™ 缓冲液
50 mM Potassium Acetate
20 mM Tris-acetate
10 mM Magnesium Acetate
100 µg/ml Recombinant Albumin
(pH 7.9 @ 25°C)
3、在不同缓冲液中的活性
NEBuffer™ r1.1: 100%
NEBuffer™ r2.1: 100%
NEBuffer™ r3.1: 100%
rCutSmart™ Buffer: 100%
4、稀释兼容性：稀释液 B
5、贮存溶液
20 mM Tris-HCl
300 mM NaCl
0.1 mM TCEP
200 µg/ml Recombinant Albumin
50% Glycerol
pH 7.4 @ 25°C
6、热失活
80°C for 20 minutes
7、甲基化敏感性
dam 甲基化: 不敏感
dcm 甲基化: 某些甲基化与酶切位点的重叠组合影响酶切
CpG甲基化: 某些甲基化与酶切位点的重叠组合阻断酶切
8、同裂酶：Bso31I、BspTNI、Eco31I
9、贮存条件
建议将试剂盒贮存于 -20℃。
10、注意事项
BsaI-HFv2 的特异性与 BsaI（NEB #R0535）相同，但经过改造后星号活性降低。
| 货号 | 产品名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| BY-R0100 | 西班牙琼脂糖 | 商城订购 | |
| 243-MCT-C-1.5 | 1.5ml微量离心管 | 500 个/盒，10 盒/箱 | 商城订购 |
| 221-R-C-10S | 0.5-10ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
| 221-R-Y-200S | 10-200ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
| 221-R-B-1000s | 100-1000ul 盒装灭菌吸头 | 96 支/盒，10 盒/组，5 组/箱 | 商城订购 |
| 货号 | 名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| R3733L | 高保真限制性内切酶BsaI-HF®v2 | 5000 units | 商城订购 |
| R3733S | 高保真限制性内切酶BsaI-HF®v2 | 1000 units | 商城订购 |
| R3733V | 高保真限制性内切酶BsaI-HF®v2 | 500 units | 商城订购 |
