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LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒
LunaScript® RT SuperMix Kit
LunaScript 反转录 SuperMix 为经过优化的预混液，可用于第一链 cDNA 合成、扩增子测序，以及两步法 RT-qPCR。该预混液含有具备热稳定特性的 Luna 反转录酶，可在更高温下合成 cDNA。试剂盒还提供小鼠 RNase 抑制剂，以保护模板 RNA 免受降解。LunaScript 反转录 SuperMix 混合液含有随机六聚体和 poly-dT 引物，可均匀覆盖整个 RNA 靶标。此外，混合液还包含蓝色染料，可在两步法 RT-qPCR 起到示踪作用。总 RNA 起始量从高达 1 µg 到低至单拷贝 RNA，均能得到稳定、线性和灵敏的检测结果。
图 1：LunaScript® 反转录 SuperMix 混合液在两步法 RT-qPCR 实验中展现了出色的灵敏度、线性关系和重复性
在 20 μl 反应体系中，使用 1X LunaScript 反转录 SuperMix 混合液，在标准反应条件下（25℃/2 分钟，55℃/10 分钟，95℃/1 分钟）将 RNA 转录为 cDNA。然后将 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB＃M3003）和 1 μl cDNA 作为模板，对 cDNA 进行 qPCR 定量；每种起始量浓度做三个重复。
A. 将梯度稀释的 Jurkat 总 RNA（1 μg – 1 pg）反转录为 cDNA，然后通过 qPCR 对 β-actin 靶标进行定量。
B. ERCC（External RNA Controls Consortium）对照 mix 1 RNA 包含 50 – 5x109 拷贝的 ERCC00130（~10 ng – 10 fg），反转录为 cDNA 后通过 qPCR 进行定量。
图 2：LunaScript 反转录 SuperMix 混合液可覆盖长转录本
设计八对引物覆盖整个 15.2 kb HERC1 转录本。在 20 μl 反应体系中，使用 1X LunaScript 反转录 SuperMix 混合液，在标准反应条件下（25℃/2 分钟，55℃/10 分钟，95℃/1 分钟），将 Jurkat 总 RNA（1 μg – 1 ng）反转录为 cDNA。然后将 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB #M3003）和 1 μl cDNA 产物作为模板，对 cDNA 覆盖度进行 qPCR 评估；每个靶标的起始量浓度均做重复。
图 3：LunaScript 反转录 SuperMix 混合液对 RNA 靶标展现了出色的线性检测能力
根据各厂商产品说明书使用市售的 cDNA 合成混合液，将 1 μg – 100 pg 人（Jurkat）总 RNA 反转录为 cDNA。然后通过 8 个靶标（丰度、长度和 GC 含量不同）的 qPCR，对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB＃M3003）或 Luna 通用探针法 qPCR 预混液（NEB＃M3004）进行 qPCR 检测。从以下方面评估了反应结果：扩增效率和 ΔCq，其中 ΔCq 衡量低起始量检测和无模板对照（NTC）扩增（ΔCq = NTC 的平均 Cq - 最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示目标扩增表现（效率 = 90 – 110%，ΔCq ≥ 3）。
图 4：LunaScript 反转录 SuperMix 混合液的第一链 cDNA 合成时间最短，仅需 13 分钟。
不同厂家的 cDNA 合成方案比较。LunaScript 反转录 SuperMix 混合液所需的反应时间最短，并且可以耐受高温，降低了 RNA 复杂二级结构的影响。
图 5：LunaScript 反转录 SuperMix 混合液在室温条件下稳定性极佳
LunaScript 反转录 SuperMix 混合液与其它市售产品在 25℃ 条件下放置 15 天，之后根据各厂商产品说明书，将 1 μg – 100 pg 人（Jurkat）总 RNA 反转录成为 cDNA。然后通过 8 个靶标（丰度、长度和 GC 含量不同）的 qPCR，对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB＃M3003）进行 qPCR 检测。从以下方面评估了反应结果：扩增效率和 ΔCq，其中 ΔCq 衡量低起始量检测和无模板对照（NTC）扩增（ΔCq = NTC 的平均 Cq - 最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示目标扩增表现（效率 = 90 – 110%，ΔCq ≥ 3）。
1、试剂盒成分：Nuclease-free Water；LunaScript RT SuperMix；No-RT Control Mix
2、储存条件：-20°C
| 货号 | 产品名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| 243-MCT-C-1.5 | 1.5ml微量离心管 | 500 个/盒，10 盒/箱 | 商城订购 |
| 221-R-C-10S | 0.5-10ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
| 221-R-Y-200S | 10-200ul 盒装灭菌吸头 | 96支/盒，10盒/组，5组/箱 | 商城订购 |
| 221-R-B-1000s | 100-1000ul 盒装灭菌吸头 | 96 支/盒，10 盒/组，5 组/箱 | 商城订购 |
| 货号 | 名称 | 单位 | 购买 |
|---|---|---|---|
| E3010S | LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 | 25次 | 商城订购 |
| E3010L | LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 | 100次 | 商城订购 |
