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长片段核酸如何提高回收效率

版权所有,转载请联系基因市场部
2025-09-19

#1

别人的实验


实验室里,隔壁课题组的师兄又兴高采烈地跑出去测序了。他的Nanopore库又构建成功了。

#2

我的实验


对着琼脂糖凝胶上那若有若无的长片段条带,和第N次失败的克隆转化结果,陷入沉思…

#3

我的困惑


用的都是PCR仪,跑的都是琼脂糖凝胶,切的都是同一个条带,为什么他的长片段得率和完整性总是比我好?是玄学,还是我的手艺问题?

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也许,问题并不出在你的操作手艺上,而是你选择的“工具”本身,就在默默地“切割”你珍贵的DNA。

这个隐形杀手就是——液压剪切力 (Shear Force)。


传统离心柱法原理

传统离心柱法是一项高效、便捷的技术,主要依赖于离液盐介导的核酸在硅胶膜上的可逆吸附。然而,其固有的“过膜”操作方式产生的剪切力,是其处理长片段DNA时的主要短板。

想象一下,当你用极细的吸头反复吹打、或者让DNA溶液高速挤压通过离心柱的致密滤膜时,长长的DNA分子就像一根意大利面,被巨大的水流冲断。传统离心柱法正是这个原理。


而隔壁师兄的秘密武器,就是选择了能避开这个杀手的工具——基于悬浮硅珠技术的回收方案,例如MACHEREY-NAGEL的NucleoTrap®,它可通过避免液体穿透步骤,完美地弥补了这一短板,成为长片段DNA回收的理想选择。

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这种技术的不同之处在于:整个过程DNA都在溶液中进行,通过与悬浮的硅珠温和地结合、洗涤,最后再被洗脱。就像用手轻轻托起一条大鱼,而不是用网兜猛拉上来,最大限度地避免了机械损伤。


所以,不是他的运气好,而是他的DNA从始至终都被保护得更完整,最终反映在更高的得率、更完整的条带、以及更高的下游实验(克隆、测序)成功率上


这不仅仅是理论上的优越。实测数据表明,NucleoTrap®对于长达19.4 kb的DNA片段,仍能保持高达74%的回收率。而对于更长的片段(最高至50 kb),只需在洗脱时稍加优化(如在55°C孵育),就能获得极致效果。

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两款产品该如何选择呢?

  • 如果你需要从凝胶里切下一个DNA条带(无论大小)进行回收,请选择 NucleoTrap®

  • 如果你的PCR反应完成后,想直接纯化反应液中的目的产物(并去除引物二聚体等小杂质),请选择 NucleoTrap®CR

!!!重要提示: 两者都采用温和的硅珠悬浮技术,因此都能高效回收长片段DNA(高达50 kb)

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