LICOR Odyssey 的高灵敏度、宽动态范围与准确的定量结果，确保了本研究中Western Blot结果的可靠性，为类似 microRNAs 调控机制研究提供了技术参考。

miR-7 过表达显著改变自噬相关蛋白表达：使自噬体标志物 LC3B-II 与自噬底物 p62 蛋白水平均显著升高，且雷帕霉素（自噬诱导剂）无法降低 p62 积累，证明自噬受阻（图 2D）；对控制自噬启动的经典信号通路的分析表明，miR-7 导致了自噬抑制剂 mTOR 和 AKT 的下调，同时自噬诱导剂 AMPK 的磷酸化和激活水平增加（图 2E）。

图2.miR-7 过表达显著改变自噬相关蛋白表达

miR-7过表达也可显著降低自噬融合关键 SNARE 蛋白 STX17 与 SNAP29 的表达（图3B），且 rescue 实验显示，过表达无 3'UTR（可抵抗 miR-7 抑制）的 STX17-GFP 或 SNAP29-GFP 后，LC3B-II 与 p62 的异常积累得到缓解，证实 miR-7 通过转录后抑制 STX17 和 SNAP29 阻断自噬后期融合过程（图 3E、F）。

图3.miR-7 在转录后阶段对 SNARE 复合物蛋白 STX17 和 SNAP29 的表达进行调控

此外，miR-7 还下调溶酶体功能相关蛋白，如与对照组细胞相比，转染了 miR-7 的细胞中溶酶体标志物 LAMP1 和 LAMP2的表达显著增加（图4B），关键溶酶体蛋白酶组织蛋白酶 B（CTSB）的前体及成熟形式均减少（图 4F），同时溶酶体生物发生相关蛋白 BLOC1S4、SCARB2 的表达也显著降低（图 4G），提示 miR-7 导致溶酶体功能异常，进一步加重自噬障碍。

图4.miR-7 导致缺陷性溶酶体的积累

miR-7 过表达显著下调线粒体功能相关蛋白 VDAC1、SDHC 的表达，表明线粒体呼吸链功能受损；同时，糖酵解关键酶 ENO2、PDK1 的蛋白水平明显降低，其中 ENO2 作为 GBM 预后相关分子，其表达下调直接印证 miR-7 对糖酵解的抑制作用（图5D、F）。

图5.miR-7 对糖酵解的抑制

在异种移植模型中，ECM 重塑相关蛋白 LGALS8的表达显著降低（Suppl Fig. 9C），提示 miR-7 通过下调该蛋白影响 ECM 与肿瘤细胞的相互作用，进而抑制肿瘤侵袭。

图6.在异种移植肿瘤中的 LGALS8 基因表达情况

参考文献：

https://doi.org/10.1186/s13046-025-03504-6

LICOR Odyssey系统在Western Blot成像中的优势

LICOR Odyssey能够在同一张膜上同时成像多个条带，无需剪膜，满足了期刊杂志对于目的蛋白和内参蛋白在同一膜上成像的要求。

在进行蛋白质磷酸化Western Blot分析检测时，LICOR公司的Odyssey 双色近红外荧光Western Blot检测方法使用不同荧光基团标记的二抗，即可同时检测磷酸化蛋白水平和该蛋白的总水平，因为无需进行剥离及再孵育，缩短了磷酸化蛋白检测的时间，实现了高效便捷的磷酸化蛋白水平和该蛋白的总水平检测，同时蛋白定量更为准确。

LICOR Odyssey还能实现高通量Western Blot检测，称为In-Cell Western，其具有广泛的应用领域，包括药物筛选、细胞信号通路研究、病毒感染研究、疾病研究、药物治疗效果评估以及基础细胞生物学研究等诸多领域。更重要的是，它还是美国药典官方推荐的胰岛素检测技术。这种多功能性和权威认可，使In-Cell Western技术成为了现代生物医学研究和药物开发中的不可或缺的工具。