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【Nature文献速递】Odyssey助力蛋白降解研究，高分文章不用愁
Odyssey双色近红外激光成像系统 2024年9月25日华盛顿大学David Baker教授研究团队在国际生命科学顶尖期刊《Nature》上发表了题为“Designed endocytosis-inducing proteins degrade targets and amplify signals”的研究论文。该研究提出了一种新型的从头开始的蛋白质设计方法，称为“Endo Tags”，这些Endo Tags能够识别并结合特定的细胞表面受体，通过引导这些受体进入内吞途径，促进目标蛋白质的降解，并在细胞信号传导中发挥增强作用，从而放大信号以及下游的细胞反应，具有在生物医学研究和治疗中应用的潜力。 由于EGFR在癌症中经常过表达，在调节细胞增殖中起重要作用，因此，本研究重点评估了Endo Tags靶向和降解EGFR的能力。针对不同的细胞表面受体系统，如胰岛素样生长因子2受体（IGF2R）、无唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）、分选蛋白（sortilin）和转铁蛋白受体（TfR），设计靶向肝脏和大脑的融合蛋白，测定特定蛋白质EGFR的表达。结果发现，Endo Tags能起到靶向降解剂的作用，通过敲除TfR和sortilin的回补实验发现，EGFR下降的表型被逆转，进一步表明降解是由Endo Tags诱导的。结合体内验证和体内评估，最终证明了该系统在疾病治疗中的潜力。其中，通过Western Blot实验监测蛋白质降解是在Odyssey CLx仪器上实现的，REVERT总蛋白染色方式做均一化，并通过Image Studio软件进行数据的定量分析。 本研究中部分Western Blot完整扫描图展示： 向右滑动查看图片~ LI-COR Odyssey系统在Western blot成像中的优势 1. LI-COR Odyssey能够在同一张膜上同时成像多个条带，无需剪膜，满足了期刊杂志对于目的蛋白和内参蛋白在同一膜上成像的要求。 2. 在进行蛋白质磷酸化Western Blot分析检测时，LI-COR公司的Odyssey 双色近红外荧光Western Blot检测方法使用不同荧光基团标记的二抗，即可同时检测磷酸化蛋白水平和该蛋白的总水平，因为无需进行剥离及再孵育，缩短了磷酸化蛋白检测的时间，实现了高效便捷的磷酸化蛋白水平和该蛋白的总水平检测，同时蛋白定量更为准确。 3. LI-COR Odyssey还能实现高通量Western Blot检测，称为In-Cell Western，其具有广泛的应用领域，包括药物筛选、细胞信号通路研究、病毒感染研究、疾病研究、药物治疗效果评估以及基础细胞生物学研究等诸多领域。更重要的是，它还是美国药典官方推荐的胰岛素检测技术。这种多功能性和权威认可，使In-Cell Western技术成为了现代生物医学研究和药物开发中的不可或缺的工具。 参考文献 [1]Designed endocytosis-inducing proteins degrade targets and amplify signals[J].Nature.DOI:10.1038/s41586-024-07948-2.
