固相合成生产的寡核苷酸制剂的纯度可以达到比较高的水平，然而对于其他应用领域，特别是用作治疗用途的寡核苷酸，我们依然需要利用纯化来去除其中不完整或是错误的序列。

在合成的寡核苷酸中，总是存在小部分的错误序列，包括碱基的缺失或插入（例如，N-1或N+1，N指靶寡核苷酸的长度）。错误序列的频率会随着合成的寡核苷酸长度增加而增加，因此错误序列在终产物中所占的比例会随靶核苷酸的长度增加而明显提高。

通常来说N-1的错误序列较难从全长的靶寡核苷酸中分离出来，因为它与靶核苷酸长度和带电量最接近。常见的纯化策略包括有疏水层析/反相层析（如果保护基团DMTr未去除）和阴离子交换层析。

阴离子交换色谱（AEX）是一种有效的寡核苷酸纯化技术，可在单个步骤中获得高纯度和高收率。

一起来看WorkBeads 40Q阴离子交换纯化填料在两种寡核苷酸纯化中的优秀表现！

使用WorkBeads 40Q 针对1 mg (上样量为填料动态结合载量的0.06%)20聚体寡核苷酸在变性和非变性条件下进行初步的纯化，洗脱产物以1mL的体积单位进行收集后，对产物纯度进行检测：

上图是在两种缓冲液体系下(A：使目标序列不变性; B使目标序列变性) 使用WorkBeads 40Q进行纯化的色谱图。

红色虚线是条件A，蓝色实线是条件B，绿色虚线是条件A的洗脱条件，绿色实线是条件B的洗脱条件。

上图黄色柱状图显示正确长度的目标序列在A2-A8洗脱产物中的得率分布；蓝色柱状图显示在A2-A8洗脱产物的纯度分布，柱状图上方的深蓝色数字是N-1的错误序列在A2-A8中的含量百分比。

如图可见，在收集的洗脱峰的中部目标序列的纯度和得率达到最高。

在工艺级别的纯化中，目标通常是最大限度地提高产量的同时达到预定的纯度要求。因此在达到纯度要求的前提下，可收集的洗脱峰越范围越大则牺牲产品的产量越少。为了研究扩大纯化条件，将132 mg上述20聚体寡核苷酸制剂上样到WorkBeads 40Q柱中（上样量为填料动态结合载量的80%）。

在盐浓度洗脱梯度开始时，N-x的错误序列杂质被洗脱，全长的寡核苷酸在洗脱峰梯度的后期纯度和得率达到最高。

对于此20聚体，单独使用WorkBeads 40Q纯化此固相制备寡核苷酸可以将样品纯度从85%提升到95%，且大上样量也同样适用：

从表中可以看到，在将洗脱液汇集从55 ml 到35 ml，全长寡核苷酸的纯度略有下降，而得率显著提升，在大上样量的情况下，WorkBeads 40Q对此20聚体依然有良好的纯化表现。

针对12.5 mg合成的纯度为79.5%的45 nt RNA粗提物，使用三种阴离子交换填料进行动态结合载量的测试对比，其中WorkBeads 40Q和Capto Q ImpRes具有40微米的基球直径，TSKgel SuperQ-5PW是20微米的基球直径。纯化条件是20 mM磷酸钠缓冲液，7%乙腈,pH 7温度50°C，样品保留时间为2.5分钟，WorkBeads 40Q对纯化此RNA可达到 56.4 mg/mL填料的动态结合载量，高于另外两个同类型竞品30%以上。

Bio-Works专注于设计开发，生产和供应用于分离纯化抗体、蛋白质、多肽、寡核苷酸、病毒和其他生物分子的纯化填料，产品可用于生命科学与生物制药的开发与制造。其短链交联的生产方式可获得尺寸一致的刚性琼脂糖树脂填料 WorkBeads^TM，优化的孔隙结构可带来产量和纯度的良好组合，具有高分辨率和易放大生产的良好性能。