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NEB特辑 | 内切酶，你值得用更好的！「内附惊喜活动」
分子生物学的诞生与发展深入揭示了生命现象的本质，使整个生命科学产生了深刻的分子革命。 限制性内切酶的发现，奠定了分子生物学基础，并在克隆和重组DNA技术中占有重要地位。
50年来，NEB一直为科研工作者们提供优质的限制性内切酶产品，从未停滞过对限制性内切酶进行基因工程改造的创新之举，内切酶的品质和特异性得到大幅度提升。 NEB为您提供全面的商业化 限制性内切酶种类， 应有尽有，一站式供应！ 1 近280种限制性内切酶 2 ＞180种省时酶， 不止满足5分钟快切， 更能安全过夜切 3 ＞210种限制性内切酶在rCutSmart™ 缓冲液中具有100%活性 4 35种高保真（HF）限制性内切酶 星号活性降低； 快速（5-15min）； 统一rCutSmart™缓冲液； 紫色上样染料消除UV阴影
今天就让我们共同了解一下， 为什么NEB的限制性内切酶可以 如此优秀
！
1 为什么要「不断优化内切酶」？
虽然内切酶反应不是一个复杂的反应过程，但它通常是克隆实验中的关键步骤之一，因此不容忽视。
到目前为止，NEB 已对近280种内切酶进行了酶切反应时间的重新评估，寻找出>180种既能在 5-15分钟内完成酶切反应，又能过夜酶切且底物无损失的省时内切酶； 对容易出现星号活性的内切酶进行基因工程改造，筛选出降低了星号活性的高保真内切酶； 对所有内切酶进行反应体系优化，将>210种内切酶统一到同一反应缓冲液系统。
2 什么是「重组内切酶」？
天然内切酶虽好，但是由于受其原宿主菌生长环境等因素的影响，内切酶的表达量受到很大限制，因此表达量不高，也经不起纯化，其中存在的核酸酶、磷酸酶及其它酶类污染会直接影响克隆实验效果。 而利用基因重组技术克隆表达的内切酶（重组酶），产量高，纯度高，经得起纯化，避免了其它各种酶类的污染，而高纯度的重组酶正是实验成功的保证，同时重组酶批次间差异小，是实验重复性好的基础。 NEB 不仅是率先将内切酶商业化的公司，更重要的是NEB首先利用了重组技术进行内切酶的克隆表达。 目前，NEB提供近280种限制性内切酶，其中超过250种以重组形式提供，以及多种重组聚合酶和修饰酶，适用于各种应用。 NEB重组内切酶的图标是：
DNA 片段连接不成功？ DNA 片段插入到克隆载体后却切不开？ 克隆后表达不出蛋白， 测序后发现是由于缺少了几个碱基而导致了 读码框架移位？ ...... 这些克隆失败的原因都有可能是因为使用了纯度不高的内切酶而导致的。 核酸外切酶的污染不容易被使用者发现，但是会直接影响到克隆实验。下面的实验证明了杜绝外切酶污染是非常重要的。 1% 琼脂糖电泳显示： Lane 1: 1 Kb DNA Ladder Lane 2: 对照载体 pBR322 Lane 3: 载体 pBR322经EcoRV（NEB）酶切 Lane 4: 载体 pBR322经EcoRV（Company X）酶切
从胶图上，能看出3和4的区别吗？显然不能。但是外切酶的污染其实已对克隆和研究造成了影响。
将酶切后的载体重新连接，转化后用菌液分别在Amp和Tet平板上划线，如果酶切没有对pBR322的基因造成影响，Amp和Tet平板上都将会长满菌落。
竞品由于存在核酸酶污染，导致基因表达缺失；NEB的内切酶产物不影响克隆实验。
结果说明，NEB重组酶的高纯度，大大减少了核酸外切酶的污染，保护了DNA末端不被损伤，从而保证了克隆实验的成功率。
3 什么是「省时内切酶」？
NEB于2013年4月对省时内切酶（Time-Saver™）进行了重新定义，符合省时内切酶的酶不仅可以在5-15分钟内完成酶切反应，同时还能经得起过夜酶切，不会损伤 DNA 末端。
NEB 省时内切酶的图标是：
通常，进行限制性酶切时都需要在50μl反应体系中，加入1μl酶反应1小时来消化1μg纯化的DNA。NEB Time-Saver 特性的酶，可以大大加速筛选进程。提供超过180种的酶在建议反应条件下，加入1μl就可以在5-15分钟内消化1μg DNA，也可以过夜酶切。
更多信息请登陆 www.neb.com/TimeSaver。
4 什么是「高保真内切酶」？
NEB一直致力于限制性内切酶的研究和改进，高保真限制性（HF）内切酶经基因工程改造，与其野生型有相同的特异性，在rCutSmart反应缓冲液中都有活性，但降低了星号活性。
很多技术都需要在非最佳条件下使用内切酶，如：克隆、基因分型、突变检测、图谱分析、探针制备、测序和甲基化检测等。HF内切酶降低了星号活性，建立酶切反应更加灵活，在更宽泛的反应条件下，获得更好的酶切效果。
除了降低星号活性外，所有的HF内切酶都能在兼容性强的rCutSmart反应缓冲液中达到优秀的切割效果，简化双酶切反应。并且HF内切酶全都是省时内切酶，能在5-15分钟内消化底物DNA，也可过夜酶切而不会降解DNA。
了解更多高保真内切酶的相关信息，请登陆
www.neb-china.com或 www.neb.com/HF。
5 什么是 「rCutSmartTM统一缓冲液系统」？
大家在做克隆实验时一定都体会过反复纯化底物DNA的繁琐，它不仅增加了实验开支，更会在每步纯化过程中导致底物损失，甚至引入污染，造成底物DNA 的降解。 为了解决上述问题，NEB首先提出了兼容的缓冲液体系概念，使克隆反应的每一个步骤如：内切酶反应、去磷酸化反应，连接反应等，都能在同一种缓冲液体系中完成。 NEB一直为如何能更简便的使用内切酶而做着不懈努力。从2013年开始，NEB将大部分的内切酶统一到同一缓冲液系统，该体系称为 rCutSmartTM。 目前，NEB有超过210种内切酶使用rCutSmartTM 缓冲液，由于rCutSmartTM已经添加有重组白蛋白，因此省去了多余的加样步骤，从而减少可能带来的影响，简化实验步骤，提高实验效率，让双酶切实验更加轻松自如。 此外，许多DNA修饰酶在rCutSmartTM 缓冲液中也具有100%活性，因此也免去了后期的纯化步骤。
更多产品信息可访问www.NEBCutSmart.com。
6 常用的「内切酶工具软件」
登陆NEB中国网站www.neb-china.com，在页面下方可找到如下三个软件：
Enzyme Finder 使用此工具可按名称、序列、突出或类型选择限制性内切酶。使用单字母代码命名法输入您的序列，酶查找器将识别适合该作业的酶。 NEBcutter™ v3.0 使用此工具可识别限制性位点，指示DNA序列中的切割频率和甲基化状态灵敏度。在Ⅱ型和市售的Ⅲ型限制性内切酶之间进行选择，以消化DNA。 Double Digest Finder 作为NEBcloner的一部分，该工具将帮助您在设置双酶解时选择反应缓冲液，这是一种常见的节省时间的程序。选择合适的缓冲液将帮助您避免星号活性和样品损失。
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