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PacBio HiFi测序 专业术语简介

版权所有,转载请联系基因市场部
2024-01-10

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揭秘 PacBio 测序中的专业术语


HIFI 原理与表现

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PacBio 单分子实时 (SMRT)测序技术经过多年的发展,通过优化并平衡酶读长与插入片段长度间关系,我们开发了一种基于CCSCircular Consensus Sequencing)的高准确率长读长测序模式 —— HIFI 测序能够在提供长读长Read10-20kb的同时,兼顾准确性(平均 Q30,99.9%准确率 


HIFI  数据表现

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这是人类基因组DNA样品构建的15kb长度文库下机数据结果。HIFI 平均读长 15kb。




文库结构  SMRTbell

SMRTbell 哑铃型结构 —— 双链DNA 两端会连接上发夹结构的接头Adapter

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以下视频来源于

基因售后服务




Polymerase Reads / Subreads / CCS Reads / HIFI Reads


1

Polymerase Read

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Polymerase read —— 在有效ZMW孔中,由聚合酶合成的核苷酸序列。仅含高质量HQ 区域,包括接头序列和文库序列。

2

Subreads

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Subreads — 除接头分子后的文库序列。

3

CCS Reads

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CCS reads —— 由每个ZMW 孔内产生的 Subreads 所生成的一致性序列 Circular Consensus Sequencing reads

4

HiFi Reads

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HIFI reads  —— 准确率≥Q20的CCS reads。 


什么是 P0/P1/P2 ?


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目前用于Revio的SMRT Cell测序芯片,具有2500万个ZMW孔;

Sequel II/IIe的SMRT Cell 8M 测序芯片,具有800万个ZMW孔。


ZMW 孔  :  Zero-Mode Waveguides,零模波导孔 ,直径100nm。


P0 (“空 ZMW”)  :      

ZMW孔没有产生任何有效数据 —— 没有采集到有效荧光信号。


P1(“有效 ZMW”):   

能生成有效序列数据(即Polymerase Reads)的ZMW孔。


P2(“其他 ZMW”

没有生成有效序列数据的ZMW 孔 —— 即非P0 / P1 的情况。可能是由于 ZMW 中结合了多个模板-聚合酶复合物,或具有高背景噪声等。



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以上是关于PacBio HiFi 测序的一些基本概念,希望对各位老师有所帮助。

请持续关注我们,敬请期待下一篇哦!


     基因有限公司作为PacBio中国区代理商,自2011年以来将PacBio第三代单分子实时测序技术引入国内,一直为国内用户提供专业的三代测序系统的安装培训,技术支持,应用培训与售后维护工作,赢得客户的一致好评与信任。基因有限公司将一如既往的支持越来越多的PacBio用户。


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关于基因

基因有限公司成立于1992年,是一家提供生命科学科研仪器、试剂耗材和技术服务的综合服务商。基于“Gene Brightens Every Life • BioTech Connects the World”——“基因燃亮生命 • 生物技术连接世界”的愿景,专注于生命科学领域前沿技术的引进和推广,致力于推动该领域国内科研机构硬件水平及实验方案的革新与升级。同时,公司也一直致力于自主品牌的科研设备的研发与生产,拥有一系列通用性强、互补性高的自主品牌产品。

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