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Western Blot耗时耗力？In-Cell Western来帮您！
引言 Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，被广泛应用于检测细胞或组织样本中蛋白的表达量。近红外荧光Western Blot的实验流程大致可分为蛋白质样品获取、SDS-PAGE电泳、转印、封闭、抗体孵育和近红外荧光检测。 In-Cell Western™(ICW)是由美国LI-COR Biosciences公司开发的一种直接在微孔板内进行的定量免疫荧光(IF)检测方法，该方法结合了Western Blot的特异性和ELISA的可重复性和高通量等特点。In-Cell Western™无需进行细胞裂解、制胶、电泳、转膜等步骤，不仅节省了时间，而且大大提高了实验通量和重复性，能更好地应用于高通量研究。
In-Cell Western™
实验原理
In-Cell Western™是在96或者384孔板内接种细胞，利用抗原抗体结合的原理，对细胞内目标蛋白进行特异性一抗及近红外荧光二抗标记，实现对目标蛋白定量分析的技术。
实验流程
①以一定密度在96/384孔板上培养细胞；
②生长到合适密度后，加药物或其他处理；
③加入多聚甲醛进行固定；
④加入Triton X-100对细胞进行透化处理；
⑤封闭30min；
⑥加入一抗孵育1h；
⑦加入荧光标记二抗孵育1h，洗涤，Odyssey 成像检测。
优势
①简单快捷。无需细胞裂解、制胶、电泳、转膜等步骤，减少误差，提高实验效率，节约时间。
②高通量。一次实验最多可检测384个样品，相当于38个十孔蛋白胶。
③重复性好、精确度好。用Western Blot法在两张膜上分别检测GAPDH和PMLC20这两种蛋白质，每张膜各进行13次重复，CV值为 0.27；用In-Cell Western™法进行30次重复，CV 值为0.08-0.16。
写在最后
In-Cell Western™技术是由LI-COR Biosciences公司提出并优化而成的一种实验技术，配合Odyssey®家族成像系统使用，更专业、效果更好。
LI-COR Biosciences公司的Odyssey®近红外激光成像系统可以实现定量Western Blot检测，具有重复性好、定量准确、 多色荧光成像、背景低、灵敏度高、可直接检测、应用范围广等多种优势，其不仅可以进行孔板的In-Cell Western检测，还可以实现近红外荧光Western Blot、可见荧光Western Blot 、蛋白胶成像、核酸胶成像、EMSA、In-Gel Western、On-Cell Western™、组织切片成像、转染效率评估等多种应用。
基因有限公司作为LI-COR产品中国区代理商，为您提供专业的近红外成像解决方案、提供更多应用咨询及技术支持。欲进一步了解详细内容，请关注我们的官方微信“基因快讯”或联系您身边的基因有限公司工作人员。
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