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PCR反应,温度控制是关键!

版权所有,转载请联系基因市场部
2022-04-13

"聚合酶链式反应"

Polymerase Chain Reaction


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聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加,广泛应用于分子生物学、农业、医学等领域。

PCR反应步骤

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典型的PCR反应包含三个步骤,变性、退火、延伸。变性主要通过加热使模板DNA的氢键断裂而形成两条单链,通常变性温度设置为90-96℃;退火主要通过降温后的模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合,形成局部双链,退火温度和引物的性质有关,不同引物退火温度不同;延伸是将反应温度调节至酶的最适温度,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′ 端延伸,合成与模板互补的DNA链。

不合适的退火温度对PCR反应的影响

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退火温度过高:

没有扩增条带或很少,PCR扩增效率低,重复性差(如图泳道2、3、4、7、13);

退火温度过低:

产生非特异性扩增条带,得不到目标扩增结果,或者PCR产物为混合物不纯(如图泳道6、10、11、12)。

温度循环是所有PCR仪的基础,温度、变温速率和保持时间是PCR反应成功的关键因素。梯度温度控制能够帮助实验人员确定PCR反应的最佳温度和保持时间,尽量减少试验次数。

Baygene

梯度PCR仪

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基因自营家族——贝晶生物研发的6通道独立控温PCR仪,可精准控制PCR退火温度,减少PCR反应探索时间。BG-TC100采用6个独立Peltier,独立样本板基座,独立温度探测器完全实现6通道独立且精准控温,实现真正的线性温度梯度。

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BG-TC100

—可精准设置6个不同温度梯度,可准确摸索PCR退火温度;

—可在6重不同温度下做样品孵育;

—可同时扩增6种不同引物;

—温度递增递减功能,可用于Touch-down PCR实验。

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