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提高蛋白质提取得率,是时候试试新方法了!
样本制备是从样本收集到实验结果分析之间的重要步骤,好的开始是成功的一半。样本的质量取决于样本制备方法,因此样本制备方法会直接影响实验结果及分析的准确性。蛋白质分析是生命科学的重要课题之一,然而,要想获得优质的蛋白质样本并不容易。如果您正在苦恼蛋白质提取过程复杂且得率低、质量不稳定、质谱结果重复性不好……那么,是时候试试换一种样本制备方法了! 马克斯-普朗克生物化学研究所所长Matthias Mann教授说,他们已经测试了一种可以以高度简化的方式制备数百份生物和临床样本的平台,最新消息称他们的实验室已经采购了该平台中通量最高的一款名为LE220-plus的样本处理系统。让Matthias Mann教授倾心的样本制备平台究竟有什么过人之处呢?下面我们将为一一揭晓Covaris 高性能样本处理系统如何提高蛋白质研究中的数据质量。 Covaris AFA技术助力样本制备 Covaris 自动聚焦声波技术(Adaptive Focused Acoustics,AFA)越来越多被用于从各类样本中分离蛋白质和其他生物标志物。AFA技术具有非接触性、等温处理、聚焦超声、通量灵活等技术特点,可以帮助研究者从各类组织和细胞中获得完整性好且保持生物活性的蛋白质样品,并提高蛋白质得率。 Covaris AFA技术样本制备优势 操作简单、流程规范化样品制备,可高通量自动化 微米级破碎,显著提高得率 可处理多种样本类型,保留样本异质性 低温高效,保护生物大分子完整性 高度可重复性,与下游分析方法兼容 举例1.从FFPE样品中提取蛋白质 FFPE样本是临床样本的主要来源之一。传统上,由于低效、不完全的脱蜡和解交联,FFPE样本一直存在蛋白质回收效率差、重复性差、制备速度慢等问题。Covaris AFA技术和Protifi™s-™的独特组合可在单管单柱中快速简便高效的提取FFPE样本中的蛋白质,提高蛋白质得率和蛋白质检测异质性,同时具有可重复性高,无需使用有毒有机溶剂的优点,此外也易于扩展通量。 Fig.1 SDS/AFA/S-Trap workflow for FFPE samples Fig.2 AFA+5%SDS+Protifi S-Trap蛋白提取方法与研磨珠提取得到的蛋白质种类比较 样本为肾脏FFPE样本 举例2. AFA 提取保留蛋白完整性 许多已发表文章都认可了AFA技术提取能帮助蛋白质保持在自然状态,保留蛋白完整性。这对于研究翻译后修饰(PTMS),如磷酸化、泛素化或蛋白活性测定非常有帮助。 Fig.3 自动聚焦超声(AFA)、探头超声、珠子研磨(minimum&maximum speed)裂解酵母菌液,得到的蛋白样品,使用2-DE双向电泳分析。 因此,Covaris自动聚焦超声(AFA)技术应用于蛋白提取,更大限度保证总蛋白的得率和活性,保护高分子量蛋白的结构完整性,保留蛋白质的泛素化、磷酸化等修饰位点。 举例3. AFA可以满足低起始量提取 在蛋白质研究当中,常遇到低起始量(细胞数<10,000)。AFA提供的精确可控聚焦声波技术提高了细胞裂解效率,帮助高效从低起始量样本中提取蛋白质、RNA、DNA、代谢物或其他目的产物。 Fig.4 分别用裂解液裂解、探头超声、AFA技术处理2000个细胞和使用裂解液裂解10^7个细胞,取相当于500个细胞的裂解产物进行PLOT-LC-MS串联质谱鉴定的结果(n=3),细胞为MCF-7细胞 举例4. AFA可处理难裂解样本 AFA超声技术已被证明可对多种样本进行有效处理:植物、细菌、酵母或肌肉等坚硬的哺乳动物组织等。 Covaris 为您提供完整优化的蛋白质制备解决方案 Covaris针对不同的下游实验,开发了不同的protein extraction buffer。无论是天然蛋白还是变性蛋白,从仪器到试剂给您一个完整优化的蛋白质制备方案。 Fig.5 Covaris蛋白样本制备完整解决方案 Fig.6 Covaris蛋白提取buffer选择表 Covaris truXTRAC Proteins-Tissue Lysis Buffer(520284)适用于FFPE样本、新鲜/冷冻组织、细胞等样本类型的蛋白提取。 基因有限公司作为Covaris公司在中国的合作伙伴和授权代理商,为您提供完整的DNA 片段化、ChIP实验、FFPE样本核酸提取、蛋白提取解决方案等。基因有限公司的宗旨是“专才为专家服务”,有专业团队为各大科研机构提供安装培训,技术支持,应用培训与售后维护一条龙服务,赢得客户的一致好评与信任。想要了解更多,请关注我们的官方微信“基因快讯”或联系您身边的基因有限公司员工。 欢迎扫描下方二维码与我们的技术人员一对一在线联系