内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（LipopolySaccharide,LPS）和蛋白的复合物，当细菌裂解时便会大量释放出来。内毒素单位为EU。

       内毒素的存在会极大程度的影响转染效率。同时内毒素还可能激活免疫细胞的非特异反应，造成实验中的假阳性。因此，为了保证高转染率和转染细胞高存活率，必须从质粒制备的过程中将内毒素去除。

       由于内毒素两亲性和负电荷性，性质类似于DNA，因此在质粒纯化中会伴随质粒一同被纯化出来。

       质粒中内毒素含量的高低常用EU/µg表示。按照EU/µg大小，质粒被分为三个级别：测序级别（>50EU/µg）、转染级别(<50EU/µg)和无内毒素级别(<0.1EU/µg)。

       当你提取的质粒DNA为了转染原代细胞、悬浮细胞或者敏感细胞；进行基因沉默研究、细胞注射显微操作；进行基因治疗或者DNA疫苗等要求极为严格的实验，就应该考虑Endotoxin-Free的质粒。

      2017年3月，张锋课题组在《Nature Protocols》发表的《Genome-scaleCRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening》中，Endotoxin-Free 的质粒获得被列为 Critical Step，同时推荐该厂家的NucleoBond Endotoxin Free Plasmid DNA kit，可避免病毒包装和细胞培养过程中内毒素残留的影响。

      来自有着近百年滤纸技术和近60年色谱技术的德国MN（MACHEREY-NAGEL）。采用阴离子交换树脂技术作为质粒纯化的原理。

       Endotoxin-Free系列设计有的Endo-EF内毒素去除试剂，有效去除内毒素，避免了长时间的氯化铯超速离心步骤，也不需要冰上孵育30min，内毒素含量远远低于市面上同类产品。

      滤纸和色谱技术相结合诞生的NucleoBond Xtra Column实现裂解液重力过滤和过柱，无需离心，减少了离心力对质粒超螺旋结构的影响。

        裂解后的质粒状态（泳道1）和洗脱下来的质粒状态（泳道4）是保持一致的。

      NucleoBond Xtra Column实现过滤以及质粒结合树脂合二为一，避免较长时间的离心。

       NucleoBond Finalizer仅需要5min即可以完成之前长达1h的异丙醇质粒离心沉淀操作。

      下方是操作步骤初体验：

       采用MAE作为阴离子交换树脂填料，与传统的DEAE材料（二乙氨乙基）相比，亲水性质的羟基（-OH）替代了疏水性质的甲基（-CH3），更小的分子量可以使每克树脂可结合更多的质粒DNA，得率可达1000μg。

DEAE:

MAE: