对于研究病毒的科研人员来说，了解病毒的感染特性是至关重要的。例如引起COVID-19的冠状病毒SARS-CoV-2，标准菌斑分析法(SPA) 是研究病毒感染特性和病毒滴度的传统方法。但该方法存在一定的局限性，操作繁琐，通量低，无法准确定量，并且容易引入认为误差。

      In-Cell Western技术，是一种依据抗原抗体结合原理，利用目标蛋白的特异性抗体及近红外荧光染料标记的二抗，在96孔板或384孔板培养的细胞上原位对目标蛋白进行定量分析的技术。该技术结合了 Western blot 技术的特异性与 ELISA 技术的可复制性和通量，目前已成为研究病毒感染特性的高效、快速、可靠的实验技术。

In-cell western 技术可监测细胞感染的HSV-1病毒

在96孔细胞培养板中用不同滴度的 HSV-1 病毒感染 Vero 细胞，完成细胞固定和一抗孵育后，使用LI-COR 近红外荧光二抗孵育，更后用 Odyssey 近红外成像系统检测荧光信号。不仅可以通过荧光信号强度判断细胞所感染的病毒滴度，而且可以根据荧光信号的位置锁定病毒感染部位。标准菌斑分析法（SPA）佐证了 In-cell western 实验结果的准确性 。

In-cell western 技术可对细胞感染的 HSV-1 病毒进行准确定量

SPA 法仅可对较低滴度的 HSV-1 感染的细胞中的病毒进行粗略定量，且需要稀释病毒，误差较大，过程繁琐，通量低，对于较高滴度的病毒无法计数。In-cell western 技术则可直接对感染高滴度病毒的细胞中的HSV-1 进行检测，无需稀释，通量高，速度快，定量准确。

In-cell western 技术适用于抗 HSV-1 病毒药物的筛选

预先使用不同浓度梯度的抑制HSV-1病毒复制的ACV药物处理Vero细胞，然后用 0.1, 0.5 和 1m.o.i. HSV-1 感染细胞，通过对病毒感染早期的ICP4 蛋白和感染晚期的gB蛋白的定量来判断ACV药物的效果，Cell-Tag 700 荧光染料对细胞进行染色起到均一化细胞数量的作用。

高通量快速的In-Cell Western已广泛应用到细胞自噬、凋亡、癌症、药物研究、信号转导、离子通道、基因表达等多个方面。更多应用文献请登录 LI-COR 官网查询：https://www.licor.com/bio/publications/

参考文献：
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Sklan, E. H. et. al. (2007). Journal of Virology, 81(20), 11096–11105. DOI: 10.1128/JVI.01249-07

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