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不用反转录酶也能检测RNA病毒吗？
2019年3月14日，来自巴西的科学家Pena等人在Scientifc Reports上发表了一种反转录等温扩增方法，用于检测寨卡病毒[1]。在这种方法中，无需额外添加反转录酶，配置的反应体系只需在72℃下孵育40分钟，再于80℃灭活5分钟，观察反应液的颜色即可得知样本中是否存在寨卡病毒。在病毒浓度低至 0.01 PFU/ml时，仍可100%检出病毒。实验结果经过RT-qPCR验证，显示检出结果一致。而且已在野捕的蚊子中证实了实验方法可行性。 滑动查看不同病毒深度下的实验结果图 该方法中使用了NEB Bst 3.0 DNA聚合酶。虽然名为DNA聚合酶，但是除了具备过去两代Bst聚合酶的特性外，该酶还表现出极强的反转录酶活性。如下图中绿色线条所示，以Jurkat total RNA为模板，Bst 3.0 DNA聚合酶可在20分钟以内将测试的两个基因（ACTB，左；HMBS2，右）反转录至饱和浓度。 NEB Bst 3.0 DNA聚合酶参数： ★ 反应缓冲液 Isothermal Amplification Buffer II Pack（与Bst、 Bst 2.0聚合酶不通用）。 链置换能力 极强，适用于环介导等温扩增实验。 反转录能力 强，可在更高72℃下作用，无需额外添加反转录酶。 5’->3’外切酶活性 缺失，确保扩增产物无降解。 扩增产物 3’末端带A。 酶浓度 S/L包装：8000U/ml；M包装：120000U/ml。 引用文献： [1] Silva, S., et al., Development and Validation of Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification (RT-LAMP) for Rapid Detection of ZIKV in Mosquito Samples from Brazil. Sci Rep, 2019. 9(1): p. 4494. 基因有限公司自1998年起作为NEB中国区更早的合作伙伴之一，一直为您提供专业的产品咨询和技术支持。
