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如何确定Western Blot最佳上样量?

版权所有,转载请联系基因市场部
2020-03-06


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Western Blot (蛋白印迹法)是分子生物学、免疫、生物化学等实验室里常用的一种实验方法。正式做Western Blot之前首先要确定一个合适的蛋白上样量,关于这一步你是怎么做的呢?>是根据师兄师姐的建议后直接上样,跑出漂亮的条带即可,然后再也没思考过这个问题;>还是通过查阅文献,发现同一种蛋白上样量竟然10ul-100ul不等;>再者根据SDS-PAGE胶的更大上样量来调整;  >你有没有在蛋白上样量摸索的过程中发现目的蛋白结果很好,但是内参蛋白条带总过曝?把上样量反复调整之后发现内参蛋白终于不过曝了,但是目标蛋白没了......


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(你踩过哪种坑,可以直接在下方留言交流一下)



到底上样量多少更合适呢?



为什么上样量这么重要?让我们先理解一下定量Western Blot这个概念。

定量Western Blot



即信号和靶蛋白的量成很好的线性比例关系,如果用标准蛋白做标准曲线可以得到目的蛋白准确的定量信息。定量Western Blot获得的数据更具有客观性,真实性。

所以保证蛋白上样量与信号值成线性关系就是判断更佳上样量的标准之一。在Western Blot实验中我们需要用内参蛋白进行均一化, 所以为了得到定量Western Blot结果,需要在共同线性范围内优化并确认靶蛋白和内参蛋白的更佳上样量。

如何快速确定内参蛋白和靶蛋白共同线性范围呢?


Empiria Studio软件,只需要几分钟,给你惊喜。你只需要这样做:将蛋白样本进行适当的浓度梯度稀释,然后将不同浓度的样本在同一张膜上做Western Blot,使用Licor Odyssey进行扫膜,获得内参蛋白和靶蛋白的图片。使用Empiria Studio软件分析不同泳道的信号值,以上样量和信号值数据进行曲线拟合,然后进行线性范围分析,几分钟给你答案。

Empiria Studio软件也是目前各大期刊杂志推荐用来分析Western Blot数据的神器。

下面我们来看一个教学案例。见证奇迹的时刻。


  


Empiria Studio不仅仅可以确定线性范围,还可以进行

自动进行统计学分析


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自动给出:平均值/标准方差/CV值等统计学数据


 

自动给出:统计学散点图或带Error Bar的柱状图



自动进行均一化



分析结果可直接提交给期刊杂志

直接分享给其他感兴趣的人员


如何确定上样量你学会了吗?



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LI-COR Biosciences公司作为近红外荧光成像的创始者和领导者,在近红外荧光领域已有25年的丰富经验,发表定量Western Blot文献超过10000多篇,是名副其实的近红外专家。


基因有限公司作为LI-COR产品中国区独家代理商,与LI-COR一起邀请您使用Empiria Studio软件来分析Western blot数据。我们共同为您提供近红外荧光从体外、体内到临床转化的完整解决方案,满足您全方位的科研需求。




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