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2020-03-05

什么是支原体?

支原体属于细菌柔膜菌纲,是一类没有细胞壁且形状多样的微生物,大小只有0.3–0.8 µm [1]。支原体是细胞培养中的常见污染物,但由于无法在普通显微镜下看到,因此日常很容易被忽视 。

Cytotechnology 39: 75–90, 2002.

图1:电子显微镜下的支原体(箭头所指)

支原体对细胞的影响

虽然不容易看到,但对细胞的影响却不容忽视。支原体污染会引起细胞形态改变,DNA和蛋白表达变化,甚至是细胞凋亡。支原体会和细胞竞争培养基中的营养物质,导致细胞代谢发生改变,从而导致细胞变形和增殖速率大大下降[1,2]。研究表明,通过基因芯片的检测可以发现支原体能影响细胞数百个的基因表达,导致细胞通路改变,有些变化高达10-12倍[3]。而通过RNA-Seq的数据比较也发现了61个基因的表达情况受支原体的污染程度影响[4]。更有研究发现,支原体甚至会影响癌细胞对药物的耐药性[5]。因此对于科研来说,支原体对细胞造成的影响,更终导致的,就是实验结果的差异和低重复性。对于临床治疗,如果把含有支原体的生物制品用在人体上,后果更是不堪设想。研究发现在90%-95%受污染的细胞系中,都有发现会导致盆腔炎和风湿性关节炎的支原体[4]。

DOI 10.1007/s12015-015-9630-8

图2:从肿瘤组织上分离下来的癌症干细胞,被支原体感染的和没被感染的细胞培养对照。


德国细胞培养和分析老品牌PromoCell提供一系列支原体预防,检测和去除的产品,助你获得稳定高质量,干净的细胞培养。

1

支原体检测(PCR法/qPCR法)

PCR和qPCR由于其灵敏度和准确性,是更常用的支原体检测方法之一[1,2,6],并有大量文献支持。PromoCell所提供的支原体检测试剂盒:

  • 超高灵敏度:可以检测低至10-20个支原体;

  • 高特异性:能检测到全部会导致培养基污染的支原体种类;

  • 结果准确性:试剂盒里面含有阴性对照(也可作为内参)和阳性对照DNA,使结果可均一化,提高检测可重复性。

  • 操作简单快速:一次实验即能检测多种支原体的污染;3小时能完成检测;

图3:检测支原体的试剂是预先分装在每个管子的冻干物,检测的时候只要往管子里面加入样品和溶解缓冲液即可,无需再一个个管子配预混液。

2

支原体去除

由于其体积小,加上其结构的灵活性,支原体无法通过滤膜(220 nm孔径)去除。PromoCell提供两种支原体去除方案:

  • 一种是非抗生素法,通过非抗生素试剂彻底破坏支原体后,再通过抗生素来防止再污染。对细胞毒性低。

  • 一种是混合的抗生素法,可有效去除细胞培养中的支原体污染,而且不会产生抗药性。

3

微生物污染预防

如果细胞被支原体污染了,将需要大量的时间和金钱进行去除,严重的只能把细胞丢弃。因此做好支原体的预防意义重大。PromoCell提供细胞培养箱,水浴和生物安全柜中的实验台消毒,预防包括病毒,细菌,真菌,孢子在内的多种微生物,为你的细胞培养提供全方面到位的保驾护航。

产品类型:细胞培养箱细菌抑制剂/水浴细菌抑制剂/支原体去除喷雾/孢子去除喷雾/孢子去除湿巾等等。

Reference: 

[1] Drexler, H.G., Uphoff, C.C. Mycoplasma contamination of cell cultures: Incidence, sources, effects, detection, elimination, prevention. Cytotechnology 39, 75–90 (2002).

[2] Nikfarjam L, Farzaneh P. Prevention and detection of Mycoplasma contamination in cell culture. Cell J. 2012;13(4):203–212.

[3] Miller CJ, Kassem HS, Pepper SD, et al. Mycoplasma infection significantly alters microarray gene expression profiles. Biotechniques. 2003 Oct;35(4):812-814. DOI: 10.2144/03354mt02.

[4] Olarerin-George AO, Hogenesch JB. Assessing the prevalence of mycoplasma contamination in cell culture via a survey of NCBI's RNA-seq archive. Nucleic Acids Res. 2015;43(5):2535–2542. doi:10.1093/nar/gkv136

[5] Lyn M. Huff, Sachi Horibata, Robert W. Robey, Matthew D. Hall, and Michael M. Gottesman, Journal of Medicinal Chemistry 2020 63 (3), 1434-1439

[6] Young, L., Sung, J., Stacey, G. et al. Detection of Mycoplasma in cell cultures. Nat Protoc 5, 929–934 (2010). https://doi.org/10.1038/nprot.2010.43



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