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高精度长读长测序技术助力解析罕见遗传病
日本横滨市立大学的Satomi Mitsuhashi和Naomichi Matsumoto在《Journal of Human Genetics》上发表了一篇综述性文章，很好地总结了长读长测序技术在解析其他方法无法阐述的罕见疾病中的实用性。
文中写道：“使用短读长测序技术进行全外显子组和基因组测序，目前的诊断率不到50％，仍然存在许多原因不明的罕见遗传疾病。这可能有很多原因，但是一个合理的解释是，与疾病相关的突变发生在传统测序技术难以检测到的基因组区域中，或者是该突变类型采用传统测序技术难以检测。”
更近许多项目已经使用了长读长测序技术来发现与罕见疾病相关的致病变异。科学家说道：“这些研究结果为进一步应用长读长测序技术来鉴定未解决的遗传疾病中的致病突变进而加深对人类基因组和疾病的了解提供了希望。”
该综述讨论了几种类型的致病变异，包括串联重复，结构变异，复杂的重排和转座子。除列举了诸多使用长读长测序技术来寻找致病变异的研究外，文中还阐述了长读长测序适用于检测这些变异的原因。例如，对于串联重复序列，他们指出“长串联重复序列很难通过Sanger测序法进行分析”，而“长读取是检测重复序列变化的直接方法，因为足够长的读取可以涵盖整个重复序列以及侧翼独特的序列。”
Summary of clinical long-read sequencing application in genetic diseases
如上图所示，以PacBio SMRT测序技术为代表的长读长测序技术极大拓展了人们对各种疾病遗传机制的探索分析。
作者在文章中也列举研究者利用CRISPR代替PCR扩增，使用PacBio No-Amp靶向测序应用靶向基因组区域。 在研究中科学家“发现这种方法准确地获得了目标区域的高覆盖率数据读取。” （PCR free的靶向捕获技术遇上PCR free PacBio SMRT测序）
美国PacBio公司已推出基于CRISPR/Cas9靶向捕获方案，该方法无需PCR扩增即可对目标区域进行捕获，减少PCR扩增引入的误差同时还可保留靶向区域碱基修饰信息，操作流程如右图所示。详情请点击“阅读原文”。
展望未来，作者提出了解决罕见病病例的工作流程：从短读长测序进行外显子组或全基因组的小变异开始，如果仍然不能解决问题，则转而对大变异进行长读长测序。 他们总结道：“当怀疑重复疾病或复杂的染色体重排时，强烈建议进行长读长测序。”
PacBio HiFi Reads 一网打尽
SNP、InDel和SV大小变异
通过优化和平衡酶读长与插入片段的长度，PacBio开发了一种基于CCS（Circular Consensus Sequencing）的高准确率长读长测序模式——HiFi Reads。HiFi reads在基因组从头组装，SNVs和Indel检测以及结构变异检测中的表现（Nature Biotech文章验证了PacBio HiFi Reads进行基因组组装及变异检测的出色性能）使得只使用一种测序平台就全面检测临床及疾病遗传研究中所有的变异类型成为可能。
基因有限公司作为PacBio公司在中国区的独家代理商，自2011年以来将PacBio第三代单分子实时测序技术引入国内，一直为国内用户提供专业的三代测序系统的安装培训，技术支持，应用培训与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。基因有限公司将一如既往的支持越来越多的PacBio用户。
