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蛋白定量，除了A280 ，您还可以用A205！

2019-08-12

大伙儿都知道，采用吸收光法在280nm处可以非常简单快速的进行已知消光系数的纯化蛋白的定量检测。但是呢，采用该方法的前提是：蛋白中必须含有酪氨酸或色氨酸这样的芳香族氨基酸，才能通过苯环在280nm处的特征吸收进行蛋白质的定量检测。

那么问题来了！如果您要检测的蛋白样品中无芳香族氨基酸可怎么办呢？必须要用比色法如Pierce660、BCA、Bradford、Lowry等方法来定量吗？那您又要做标曲、又要加试剂进行颜色反应，过程好繁琐啊！

NO! 无需比色法，您只需要选择NanoDropOne/OneC的A205法就可以对无芳香族氨基酸的蛋白质/多肽进行定量啦！

NanoDrop One/OneC已经把A205蛋白定量法的应用程序内置到软件内了哦！

A205法原理简介

蛋白质是由肽链组成，而肽链内的氨基酸之间是由氨基和羧基脱水缩合形成肽键连接的，而肽键在深紫外区190nm-220nm处有吸收特性，吸收波峰在205nm处，因此可以通过检测205nm处的吸收光特性来进行蛋白或者多肽的定量检测。

NanoDrop One/OneC A205法检测步骤：

选择Protein A205图标→选择方法31→检测Blank→检测样品→得到结果

（注：没有芳香族氨基酸的蛋白或者多肽的消光系数通常使用31mL/mg*cm。）

是不是操作很简单呢！

选择方法

检测结果

那么A205的方法检测的准确性怎么样呢？我们看一下测试数据吧！

粘菌素（polymyxin）就是这样一个不含酪氨酸和色氨酸的多肽，我们把粘菌素配制成不同浓度的溶液，然后分别用NanoDrop One的基座模式和Evolution 300分光光度计的比色杯模式进行浓度的检测。每个浓度梯度的样品分别在NanoDrop One的基座模式上检测3次，我们看一下在NanoDrop One上检测数据的重复性以及数据在两台仪器上是否一致？

首先我们可以看到采用NanoDrop One 进行A205多肽检测时，在检测的一系列浓度梯度的样品中，同一个样品的标准差≤0.04，说明NanoDrop One 进行A205多肽检测结果的重复性是很好的。

其次，我们将NanoDrop One A205数据和Evolution 300数据进行相关性分析，发现两组数据之间的线性相关系数R2值为0.99923，也就是说在这两台仪器上面检测的数据是非常一致的。

因此，对于无色氨酸和酪氨酸的蛋白或者多肽，也可以采用简单易用的A205吸收光法进行定量检测，结果的重复性和准确性都很优秀哦！

想要了解更多的NanoDrop One/OneC的相关信息，您也可以点击下方链接查看：

超微量分光光度计中的美猴王NanoDrop One——火眼金睛鉴定微量污染物

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