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基因优选|NEBuilder，攻克分子克隆界的“小田原城”
日本战国名城小田原城，东西长2.9公里，南北达2.1公里，城郭两旁被酒勾川和早川两条河流围绕，背靠相模湾，是座难攻不落的巨城。北条家以小田原城为根据地，统治关东地区多年。天正十七年（1589）11月，丰臣秀吉动员22万大军准备对小田原城进行包围作战。围城持续至天正十八年（1590）6月26日，小田原城西南的高地上突然出现一座巨城，史称石垣山城。面对突如其来的巨城，小田原内人心惶惶，士气低落。十日后开城投降，小田原不再“难攻不落”。自此，一统之路再无阻碍。
小田原城示意图，向左划动查看小田原包围圈及石垣山城复原图。图片来自大河剧《真田丸》及matome.naver.jp
在分子生物学技术中，将多个片段依序克隆至同一载体中，且在片段衔接处不留“疤”，一直是令科学家头疼的问题，堪称分子克隆界的小田原城。这一问题在2009年得到解决。Daniel Gibson博士和他的同事J. Craig Venter提出了Gibson组装方法。在此基础上，NEB发展出新一代 DNA 组装与克隆利器NEBuilder HiFi DNA Assembly ( E2621)。如下图所示，组装液中含有三种不同类型的酶：
1、5’外切酶，对DNA进行消化产生3’黏性末端，以便与其他片段的同源末端进行配对结合。
2、聚合酶，用于修补配对后的缺口。
3、DNA连接酶，实现无痕拼接，形成完整的双链DNA分子。
相比 Gibson Assembly而言，NEBuilder HiFi DNA Assembly (E2621) 效率更高、保真性更好，适用性更加广泛：能够对含 5' - 端和 3' - 端错配的 DNA 片段进行组装；能够用单链 DNA 寡核苷酸片段桥式连接 2 个双链 DNA 片段。
此外，在NEB还提供了功能强大、方便易用的小工具，帮助设计组装方案。点击“阅读原文”即可开始使用。
基因有限公司是NEB更早的全国一级代理商之一，从90年代合作至今，可为您提供专业的产品支持。欲了解更多产品详情，请留言或联系您身边的基因人。
