人体细胞在凋亡的过程中，DNA断裂并分泌至细胞外。健康细胞，胎儿细胞，肿瘤细胞以及移植的细胞都可以通过这种方式释放游离DNA至血液中。

随着液体活检技术的不断发展，对这些的游离核酸检测有望成为替代组织活检的重要方法。大家比较熟悉的游离核酸检测手段有定量PCR、NGS等传统方法和正在迅猛发展的数字PCR。

但cfDNA在体液中的含量非常低，通常血清中含量低于10ng/mL。 如何从含量如此低的样本中，抽提出适合检测手段的游离核酸？

液体活检技术的兴起，使得游离核酸样本的数量大增，高通量形式的核酸抽提成为了工作者们的追求，如何低成本解决通量问题？

那就从下方的描述中找到适合您的游离核酸抽提方式吧。

市面上的游离核酸抽提试剂盒大多是基于柱膜法的原理、还有一部分是基于磁珠法的抽提原理。有单管离心、多管真空抽滤、96孔板真空抽滤、磁珠法高通量等形式。更常用的为多管真空抽滤的方式。

多管真空抽滤

采用真空抽滤的方法。

在真空抽滤装置上，可同时提取24个1-10mL血清、血浆、尿液等样本, 结合&洗涤过程无需使用离心机。大多客户用此方法来抽提2-4mL血浆，得到的游离核酸用于后续的PCR、NGS、甲基化研究。整个抽提过程需要约45min-3h不等，具体的操作时间要根据使用的品牌来定。

NucleoSnap® DNA Plasma 仅需要45min 即可完成EDTA处理血浆游离核酸的抽提，是目前提取速度较快的游离核酸提取试剂盒。提取到的游离核酸可用于NGS, qPCR, ddPCR等检测手段。

单管离心

单管离心抽提游离核酸的方法一般适用于小体积血清或者血浆样本，通常样本体积范围在200uL-2mL。由于样本上样量少，游离核酸的得率也较多管真空抽滤的方式要低。此类方法得到的游离核酸一般用来进行PCR、qPCR等分子检测。

PCR需要的模板量一般是很低的。常规的20-30uL洗脱体积，一般只用到10%。有没有一种方法可以让洗脱体积更小，单位体积里面浓缩更丰富的核酸？

NucleoSpin® Plasma XS应运而生，采用独特的设计，柱膜直径是普通柱膜的一半，仅需要240uL 血浆，5-20uL洗脱液，得到高浓度核酸，后续的QPCR检测灵敏度也更高。

NucleoSpin® Plasma XS非常适合孕妇血浆中游离核酸检测。

谈论到单管离心的方式提取游离核酸，还要给大家介绍一款产品Covaris truXTRAC™ cfDNA。

Covaris truXTRAC® cfDNA提取试剂盒配合Covaris自动聚焦超声技术（Adaptive Focused Acoustics,AFA) ，主动解交联提取cfDNA，相比传统方法，cfDNA提取的得率、质量和复杂度都得到显著提高，更少的血液量即可满足下游检测分析需求。同时除提取单核小体凋亡cfDNA外，还可获取血液中少量存在的核小体二聚体、三聚体cfDNA和非凋亡长片段cfDNA，帮助后续研究获取更多疾病相关信息！

96孔板真空抽滤

采用柱膜法原理抽提游离核酸，一次可以抽提96个样本，极大的方便了样本量较多的客户。

此类产品一般只适用2mL血浆、血清等样品，提取到的游离核酸可用于NGS, qPCR, ddPCR等检测手段。

此类提取方法的代表试剂盒就是NucleoSpin^® 96 DNA Plasma。此试剂盒可以在真空抽滤的自动化核酸抽提平台使用，比如：Eppendorf。

也可以在真空抽滤装置NucleoVac 96 Vacuum Manifold 上使用，

此类方法可以极大的节省购买仪器的费用。

磁珠法高通量

磁珠法是更容易实现自动化通量抽提的一种核酸抽提方式，可处理1-10mL血浆样品，形式也更灵活。提取到的游离核酸可用于NGS, qPCR, ddPCR等检测手段。

磁珠法得率的高低主要取决于试剂盒中磁珠的类型。NucleoMag® DNA Plasma采用MN 磁珠- 超顺磁性。“超顺磁性”代表磁珠可以被磁场吸附，但是自身不会被磁化，不会聚集在一起，很容易在溶液中被悬浮；磁珠直径 1–3 µm，能够保证沉降时间，更有利于HTP处理方式，此外小珠有更大的聚集表面积，这也是磁珠拥有更大结合能力所必须的。

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