做WB实验的科研人都懂：熬了好几个通宵处理样品，结果条带模糊、背景杂乱，甚至连目标蛋白都检测不到——问题除了要排查严格验证的抗体，适合的辅助试剂也是至关重要。从样品裂解、蛋白保护，到孵育封闭、抗体检测，这四大关键环节直接决定实验成败，每一步都需要靠谱的试剂保驾护航。

作为由科学家创立、深耕信号转导领域数十年的品牌，CST（Cell Signaling Technology）精准拿捏WB实验痛点，专为科研人配齐了四大核心神器——样本裂解液、抑制剂、优化的封闭液及抗体稀释液、高特异性二抗。每一款都经过严格验证，精准匹配实验全流程关键环节，帮你避开九成实验坑，轻松拿到高质量条带！今天就带大家逐一解锁这组WB通关“王牌组合”

CST推荐的WB实验步骤

一、样品制备第一步：高效温和的样本裂解液

蛋白提取是WB实验的基础，选对裂解液方能保障实验成功。CST两款经典10X浓缩样本裂解液——Cell Lysis Buffer（#9803）与RIPA Buffer（#9806），覆盖温和到强效全场景需求，是科研人信赖的“蛋白提取双子星”！

Cell Lysis Buffer（#9803）为非变性配方，含温和去垢剂与内置抑制剂，能高效释蛋白且保留其天然构象，适配磷酸化蛋白检测、IP等对蛋白完整性要求高的场景；RIPA Buffer（#9806）含强效去垢剂，可破坏核膜，对膜蛋白、核蛋白提取效率优，适合全细胞蛋白提取，注意：变性特性可能破坏蛋白相互作用，不建议用于Co-IP。

两款兼容性广，贴壁/悬浮细胞、组织样本均适用，组织样本按100mg/1ml比例匀浆即可。使用时稀释为1×工作液，临加1mM PMSF可强化抑制效果；-20℃稳定保存24个月，支持分装，便捷又高性价比。按需选择，无需繁琐优化即可快速获得高质量蛋白，筑牢WB实验基础！

二、蛋白保护关键：抑制剂“组合拳”，锁住蛋白完整性

提取后的蛋白就像“易碎品”，一不小心就会被蛋白酶降解、被磷酸酶去修饰，导致实验功亏一篑。这时候，靠谱的抑制剂就是蛋白的“保护罩”！

CST提供多种针对性抑制剂，满足不同实验需求：如果需要广谱抑制蛋白酶，可选广谱蛋白酶抑制剂混合物（PMSF #8553或Protease Inhibitor Cocktail #5871）；针对磷酸化蛋白研究，磷酸酶抑制剂混合物（Phosphatase Inhibitor Cocktail #5870）能高效抑制丝氨酸/苏氨酸及酪氨酸磷酸酶活性。

这些抑制剂可以直接加入裂解液中使用，与CST样本裂解液搭配使用效果更佳，能最大程度保留蛋白的天然构象和翻译后修饰状态，让后续检测更准确。尤其适合信号通路研究、药物筛选等对蛋白完整性要求高的实验场景～

图1：使用 β-Catenin（D10A8）XP®Rabbit mAb  #8480，对无蛋白酶抑制剂（左图）或含 Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail缓冲液中制备且在 37°C 孵育所示时间点的 （100X）#5872  NIH/3T3  （右图）的裂解 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。在无蛋白酶抑制剂时，β-Catenin 信号在收取后 3 小时内衰减，提示蛋白质降解。在蛋白酶抑制剂混合物存在时，β-Catenin 降解明显减慢，并且信号在收取后 20 小时仍然存在。

三、孵育必备：低背景的封闭液和抗体稀释液

封闭和抗体稀释是WB实验降低背景、增强特异性结合的关键步骤，CST推荐使用脱脂奶粉Nonfat Dry Milk（#9999）而不是BSA（#9998）作为封闭液，而脱脂奶粉的品质直接影响孵育效果。CST的这款脱脂奶粉专为WB实验设计，是科研圈的“口碑款”封闭试剂。

这款实验级脱脂奶粉纯度高、杂质少，能快速高效地封闭膜上的非特异性结合位点，显著降低实验背景。CST建议您用经 TBST 稀释的 5% 牛奶，在室温下摇晃一小时，来封闭CST所有非偶联一抗，这包括磷酸化特异性和总抗体(图2）。

不同抗体的蛋白结构不同，对抗体稀释液的兼容性可能也不同。对于每个货号的抗体，在研发阶段，CST同时验证了5% BSA/TBST和5% milk/TBST，并且将最适的一抗稀释液放在产品页“Protocol”。商品化封闭液及抗体稀释液有可能导致高背景、非特异性条带、没有信号、与marker结合等，不建议使用。

四、检测核心：高特异性二抗，信号清晰不跑偏

二抗作为WB检测的“信号放大器”，其特异性和灵敏度直接决定了条带的清晰度。CST的HRP标记二抗绝对是“实力派选手”，分为抗兔（#7074）和抗小鼠（#7076）两种，多年稳坐CiteAb全球高引用抗体榜单前三名的宝座，能完美匹配绝大多数一抗。

这些二抗经过严格筛选和验证，交叉反应低，能精准结合一抗，有效避免非特异性条带；HRP标记效率高，信号放大能力强，即使是低丰度目标蛋白也能清晰检测到。搭配CST的Lumiglo化学发光检测试剂（#7003），能进一步提升检测灵敏度，让条带更清晰、结果更可靠。

基因有限公司作为CST在中国区的长期合作伙伴，将持续为您提供优质的产品、专业的技术支持与完善的售后服务。如需了解更多产品详情，请扫码添加下方技术人员微信！

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