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LICORbio Odyssey解码KRAS G12R胰腺癌MEK敏感机制，近红外成像助力精准治疗
文献速递 Odyssey的核心作用 本文中，Odyssey M多模式成像系统通过Western Blot定量检测、克隆形成实验等核心操作，为“KRAS G12R与SOS1/NF1结合缺陷→MAPK信号减弱→MEKi敏感”的机制验证提供关键数据： 克隆形成实验验证MEKi敏感性 Odyssey M对结晶紫染色后的集落进行700 nm波长成像，清晰捕获细胞增殖表型：1 nM 曲美替尼滴定后，PANC-1 KRAS G12R细胞克隆形成被显著抑制，而PANC-1 KRAS G12D细胞克隆无明显变化，氯喹单独处理对两细胞系克隆生长均无影响（图 2G）。 图2G. PANC-1细胞系经递增浓度曲美替尼处理后的克隆形成实验。 根据集落形成能力，分出高表达KRASG12R的PANC-1 CR (high colony formation)细胞与低表达PANC-1 CS (low colony formation) 细胞，用相同剂量曲美替尼处理后CR细胞集落数量更多、耐受性更强（图6G），直接证明MEK抑制是KRAS G12R细胞增殖抑制的核心，且KRA SG12R表达水平调控MEKi敏感性。 图6G. PANC-1 CR和CS细胞系经递增浓度曲美替尼处理后的克隆形成实验。 蛋白定量解析信号传导机制 Odyssey M对pERK、pMEK等信号蛋白水平进行定量分析：①基线状态下，PANC-1 KRAS G12R细胞的pERK水平仅为G12D细胞的50%，且2.5 nM曲美替尼即可几乎完全消除G12R细胞的ERK信号（图4A-C）。 图4A-C. KRAS G12D/G12R同源细胞系PANC-1的MAPK信号（pMEK/pERK）基线差异及曲美替尼对pERK的抑制效率定量分析。 ②高表达KRAS G12R的PANC-1 CR细胞中，pMEK/pERK水平显著高于低表达的PANC-1 CS细胞。曲美替尼滴定实验显示，PANC-1 CR细胞需5 nM曲美替尼才能实现ERK磷酸化近50%降低，而PANC-1 CS细胞仅需0.5 nM（图6D-E）。这些定量数据明确MAPK信号阈值降低是MEKi敏感的核心机制。 图6D-E. CR、CS细胞系中KRAS G12R表达水平对MAPK信号（pMEK/pERK）强度及曲美替尼敏感性的调控分析。 蛋白表达差异验证补偿机制 通过Odyssey M对比KRAS蛋白在不同突变型胰腺癌细胞系中的表达，结果显示KRAS G12R 胰腺癌细胞系的KRAS蛋白表达水平普遍高于KRAS G12D细胞系（图 6H），证实KRAS G12R肿瘤可通过上调自身表达，补偿WT-RAS激活不足的缺陷，维持MAPK信号传导。 图6H. KRAS G12D和KRAS G12R细胞系的KRAS蛋白表达分析。 总结 准确的检测平台 近红外荧光成像技术，产生稳定的近红外荧光信号，与传统的化学发光相比，信号不受曝光时间、温度等影响，信号与目标蛋白丰度成很好的线性比例关系，因此定量数据更准确、实验重复性更高。 宽动态范围，同一次扫描可同时成像高丰度和低丰度蛋白质，不同梯度条件下，采集弱信号的同时避免强信号饱和。 在不同的凝胶/膜上比较目标蛋白的表达丰度高低，容易引入误差和变量。该平台能够在一张膜上同时检测多种蛋白，无需Stripping 和Reprobing，能更好地满足期刊杂志对检测多种蛋白数据发表的要求。 同时成像目标蛋白和总蛋白（均一化策略） 集成化分析软件Empiria StudioTM 软件具有强大的验证、分析、报告功能，完美的满足了期刊杂志对高质量数据（从原始图像获取到重复性分析）的所有的要求。支持导入图片后自动完成分析并且操作流程简单，减少了不同操作人员之间的误差以确保获得准确的分析结果。几分钟之内即可完成常规分析方法60-120分钟的工作量。 LICORbio公司作为近红外荧光成像的创始者，在近红外荧光成像领域已有几十年的积淀。由于 LICORbio Odyssey近红外荧光成像系统可实现Western Blot精确定量，多重Western Blot检测，且重复性更高，通量更高，拥有丰富的应用范围，因而得到了全球生物医学研究人员的信赖。 可实现丰富的应用 基因有限公司作为LI-COR产品中国区代理商，为您提供专业的近红外荧光成像技术在Western Blot、In/On-Cell Western、双色EMSA、活体成像等方面的解决方案，提供更多应用咨询及技术支持。进一步了解更多详细内容，请关注我们的官方微信“基因快讯”或联系您身边的基因有限公司工作人员。 关于基因 基因有限公司成立于1992年，是一家提供生命科学科研仪器、试剂耗材和技术服务的综合服务商。基于“Gene Brightens Every Life • BioTech Connects the World”——“基因燃亮生命 • 生物技术连接世界”的愿景，专注于生命科学领域前沿技术的引进和推广，致力于推动该领域国内科研机构硬件水平及实验方案的革新与升级。同时，公司也一直致力于自主品牌的科研设备的研发与生产，拥有一系列通用性强、互补性高的自主品牌产品。 基因的服务网络遍及全国各地十多个大中城市，拥有包括仪器销售，试剂销售，市场与技术支持，维修，客服，物流等多个部门组成的完整服务体系。 我们希望通过不懈努力，为您的成功铺路搭桥，也为中国的生命科学事业赶超世界先进水平尽一己之力。欲了解更多信息，请访问www.genecompany.cn。
