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【Cell文献速递】信号通路Western Blot检测使用Odyssey，高分文章不用愁
Odyssey 1月18日，广西医科大学靶向肿瘤学国家重点实验室赵永祥教授团队在国际生命科学顶尖期刊《Cell》上在线发表了最新研究成果“Hyperacute rejection-engineered oncolytic virus for interventional clinical trial in refractory cancer patients”。该研究开创性地报道了一种静脉注射溶瘤病毒疗法，利用对人类无害的新城疫病毒（NDV）作为载体，插入猪的α1,3-半乳糖转移酶（α1,3GT）基因，构建出新型病毒NDV-GT。该病毒在感染肿瘤细胞后，可使肿瘤表面表达异种抗原αGal，触发超急性免疫排斥反应，从而引导免疫系统精准消灭肿瘤细胞，成功实现了晚期癌症治疗的重大临床突破。 其中，NDV-GT 直接溶解肿瘤并激活抗癌免疫级联反应，该过程首先通过蛋白质芯片技术结合串联质谱标签分析，发现 NDV-GT 处理后，HepG2 细胞中凋亡相关蛋白（如 LRP2）发生显著变化，Akt-IKK-NF-κB 信号通路相关蛋白差异表达。然后通过Odyssey系统进行Western blotting 实验进行结果验证，发现Akt 抑制剂（AKT-IN-6）处理后，NDV-GT 下调 Akt、IKK 和 NF-κB 的磷酸化水平，同时上调 caspase-9 和 cleaved caspase-3 表达，从而证实了 NDV-GT 通过抑制 Akt-IKK-NF-κB 通路诱导肿瘤细胞凋亡。 本研究通过Odyssey系统进行信号通路相关蛋白差异表达的检测，从而揭示NDV-GT溶解肿瘤并激活抗癌免疫的级联反应。Odyssey采用荧光染料标记的二抗来实现直接检测，其荧光信号能够稳定维持数月之久，且无需借助酶或底物。另外荧光信号的强度不会受到曝光时间的干扰，这使得定量 Western Blot的结果具备更高的一致性与可靠性。 LI-COR Odyssey系统在Western blot成像中的优势 1. LI-COR Odyssey能够在同一张膜上同时成像多个条带，无需剪膜，满足了期刊杂志对于目的蛋白和内参蛋白在同一膜上成像的要求。 2. 在进行蛋白质磷酸化Western Blot分析检测时，LI-COR公司的Odyssey 双色近红外荧光Western Blot检测方法使用不同荧光基团标记的二抗，即可同时检测磷酸化蛋白水平和该蛋白的总水平，因为无需进行剥离及再孵育，缩短了磷酸化蛋白检测的时间，实现了高效便捷的磷酸化蛋白水平和该蛋白的总水平检测，同时蛋白定量更为准确。 3. LI-COR Odyssey还能实现高通量Western Blot检测，称为In-Cell WesternTM，其具有广泛的应用领域，包括药物筛选、细胞信号通路研究、病毒感染研究、疾病研究、药物治疗效果评估以及基础细胞生物学研究等诸多领域。更重要的是，它还是美国药典官方推荐的胰岛素检测技术。这种多功能性和权威认可，使In-Cell Western技术成为了现代生物医学研究和药物开发中的不可或缺的工具。 参考文献 Zhong, L., Gan, L., Wang, B., et al. (2025). Hyperacute rejection-engineered oncolytic virus for interventional clinical trial in refractory cancer patients. Cell, 188(5), 1119 - 1136.
