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预染Marker条带异常续集：那些容易被忽视的隐藏雷区
在上一篇文章中(点此此处跳转），我们分析了预染蛋白Marker实验中常见的条带弥散、条带缺失、小分子不显、转膜失败等五大问题，也给出了对应的解决方案。本次，我们将继续就上次遗留的几个问题进行分析和解答，让您从此告别“玄学”困惑，得出科学实验结果！ 条带“变形记”——上下宽窄不一 现象：Marker条带像被“压缩”或“拉长”，垂直方向宽窄不均 幕后黑手： 电泳“发烧”：电压过高（>150 V）导致凝胶局部过热，条带迁移速率异常（高温区扩散变宽，低温区压缩变窄）； 加样孔超载：上样量>10 μL时，蛋白质溢出孔外，迁移初期横向扩散，后期压缩形成“上宽下窄”。 急救指南： 恒压电泳（100-120 V）+ 冰浴降温； 控制上样量（5-8 μL），选用平整制胶梳子。 标签蛋白检测的“真假信号” 灵魂拷问：Marker会干扰我的目标蛋白检测吗？ 事实真相： 1、常规情况：Marker与样品分属不同泳道时，几乎无干扰（抗体检测 vs 染料显色原理不同） 2、高危场景： 同泳道混合上样：Marker高浓度蛋白改变局部电场，导致目标条带迁移偏移； Marker含同源标签：如His标签Marker遇His抗体，引发假阳性； 转膜残留：预染染料转移到膜上，与荧光检测信号重叠。 避坑方案 Marker和样品泳道分开，看清Marker是否含有同源标签，优化转膜条件，每次实验必做对照。 理论值VS实际值：谁在“偷改”分子量？ 真相：预染Marker标注的是“表观分子量”，与理论值偏差±5%-10%是常态，这是由其染料修饰特性决定的，并非质量问题！ 1、染料修饰：共价结合的染料改变蛋白质电荷和构象（如35 kDa条带可能对应33 kDa蛋白）； 2、电泳体系差异：Tris-Glycine胶与Bis-Tris胶中同一蛋白迁移率不同。 以基因自营蛋白Marker（货号：PM-S001）为例 破局之道 严格按说明书条件跑胶； 用未预染Marker或已知蛋白校准； 查UniProt数据库对比“表观分子量”。 非变性胶：“标尺”失效的魔幻世界 致命误区：把预染Marker直接用于Native PAGE 1、标注值全错：非变性胶中蛋白质迁移由电荷和形状决定，预染Marker的分子量标注（基于SDS线性化）完全失效； 2、条带“集体摆烂”：染料干扰天然构象，导致迁移异常、拖尾严重。 预染Marker的染料共价偶联在蛋白质表面，可能改变蛋白质的天然电荷分布、破坏蛋白质的寡聚结构（如二聚体、四聚体）、导致迁移行为异常，无法反映真实分子量或生理状态。 救星方案 Native PAGE使用非变性胶专用Marker； 自制天然蛋白标准或选已知天然分子量和寡聚状态的蛋白质，单独跑胶并记录迁移位置，建立校准曲线。 其他“隐匿神坑” 终极避坑指南 对照三原则：Marker每次必跑，换批次必对比，异常必重复！ 保存口诀：“分装、避光、勿反复冻融，离心、控量、低温存” 异常排查路线图： 预染蛋白Marker是实验的“沉默助手”，却也可能化身“隐形刺客”。唯有摸清它的脾性，规范每一个细节，才能让Western Blot不再上演“悬疑剧”！你在实验中还遇到过哪些Marker“神坑”？欢迎留言区吐槽！（小编将在下期持续为大家解惑） 广告一波 货号：PM-S001 电泳/转膜均可获得清晰不弥散条带； 红绿蓝三色预染，标记位置符合常规使用习惯； 兼容SDS-PAGE和Bis-Tris （MOPS/MES）不同凝胶缓冲液体系！ 欲了解更多产品详情，请扫码添加您的专属技术顾问，基因有限公司将以热忱与专业，为您提供最优质的服务！
偏差来源：
翻车现场：
条带异常 → 查储存/批次 → 换新胶/缓冲液 → 调电泳参数 → 验证转膜条件 → 交叉对比抗体！
优势：
条带锐利，分布均匀，分子量准确；
