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Western Blot 常见问题及解决方案
Western Blot 常见问题及解决方案
1 背景过高 原因 封闭不充分 一抗过浓 孵育温度过高 一抗二抗封闭剂间有交叉反应 洗膜不充分 膜过于干燥 对策 延长封闭时间或更换封剂 稀释一抗 4℃孵育 加入Tween-20，以减少交叉反应 设二抗对照，稀释二抗 增加洗膜次数 避免干膜
2 无条带或太弱 原因 一抗二抗选择错误 一抗二抗浓度过低 一抗失效 蛋白含量过低 转膜不充分或洗膜过度 过度封闭 二抗受叠氮钠抑制 底物与酶失效 曝光时间过短 对策 选择正确抗体 检查抗体和显色试剂盒保质期 提高样品蛋白含量 设内参对照，转膜对照 转膜效果的检查 减少洗膜时间 降低封闭液浓度，减少封闭时间 延长曝光时间
3 杂带过多 原因 蛋白样本具有多种修饰 蛋白样本降解 蛋白存在二聚体或多聚体 一抗二抗浓度过高 多克隆抗体 对策 使用去修饰的试剂 使用蛋白酶抑制剂 电泳上样前，煮沸10 min，以增强蛋白质解聚变性 降低抗体浓度 选用单克隆抗体
4 其他问题 背景白色条带 → 转膜时有气泡或抗体分布不均 暗片现白条带 → 一抗或二抗加入过多 目的条带过低/过高 → 胶浓度不合适 “微笑”条带 → 迁移过快、电泳温度过高
好的实验结果
成像系统非常关键！
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1 高灵敏度&长曝光 高量子效率CCD/CMOS，先进制冷降噪和图像处理； F0.8大光圈镜头，单位时间内进光量更多； 支持长达60分钟的长曝光，确保极低光环境下也能获得清晰图像。
2 高分辨率&自动聚焦 900万/605万高像素可选； 高分辨率的电动镜头； 支持自动聚焦功能，大大提升成像质量。
3 高度集成&智能操作 一体机设计，15.6英寸大尺寸触摸屏； 12代i5控制单元，高效人机交互； 智能操作：一键自动曝光&对焦、零键采集。
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