①凝胶准备:
准备蛋白质样品的SDS-PAGE电泳。
②染色前处理:
用去离子水冲洗凝胶去除SDS和电泳缓冲液。若凝胶上有琼脂糖也需去除。
③染色液准备:
通常配方为0.1% Coomassie Brilliant Blue G-250在50%甲醇和10%冰醋酸的溶液中。
④染色:
将凝胶浸入染色液中,摇床震荡确保凝胶与染色液充分接触。染色时间可以从30分钟到几小时不等,具体取决于蛋白质的量和染色液的浓度。
⑤染色增强(可选):
为了增强染色效果,可以将染色后的凝胶在染色液中加热,例如在微波炉中加热30秒到1分钟。
⑥脱色:
染色完成后用脱色液(通常为10%甲醇和7%冰醋酸的溶液)替换染色液进行脱色,直到背景清晰,蛋白质条带明显。
⑦存储凝胶:
如果需要,可以将成像后的凝胶保存在脱色液中,以防止染料进一步扩散。
⑧注意事项
操作时应穿戴适当的个人防护装备,如手套和护目镜,因为染色液和脱色液可能对皮肤和眼睛有刺激性。