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没有比这更好的发光检测仪!

版权所有,转载请联系基因市场部
2024-11-20

发光

    在生命科学研究中,经常会使用到不同类型的发光检测。大多数类型的发光机制都很简单:发光反应涉及生成一种不稳定的高能中间体,该中间体转化为稳定的低能产物,两种物质之间的差异能量以光的形式释放出来。发光检测由于其显著的优势,正在被广泛使用。

发光检测的优势:

高灵敏度:发光检测具有非常高的灵敏度,能够检测到极低浓度的发光物质。

宽动态范围:发光检测可以覆盖从低到高的发光强度,提供灵活的检测范围。

低背景干扰:由于样品中除了感兴趣的分子之外通常没有发光物质,因此背景干扰非常低。

非破坏性检测:发光检测不需要破坏样品。

安全性:与基于放射性的测定相比,发光测定中最常用的试剂是无害的,操作更安全。

发光的局限性:

基于发光的最灵敏的检测是闪光检测,这意味着信号的半衰期非常短(几秒甚至更短),因此必须使用配备自动试剂注射器的仪器来分配底物。这也使得多次测量样品变得困难,因为这需要每次分配新的底物、稀释样品,并且可能超过微孔板或试管的最大容量。

在辉光分析中,信号的半衰期很长(通常为几个小时),因此无需使用带有自动试剂注射器的仪器,但会出现一个新问题:串扰。当测量来自某个孔的信号并且来自相邻孔的光到达检测器时,就会发生串扰。如果来自相邻孔的信号比正在测量的孔强得多,则这种不必要的光可能会导致对测量值的估计过高,从而产生错误的结果。

在这种情况下,应该如何保证发光检测的效率和灵敏度呢?让我们一起往下看~



#advantage

Berthold的解决方案

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    德国伯托(Berthold)公司是生命科学、过程控制和辐射防护领域的全球技术领导者。自1949年成立以来,Berthold的生物分析系统解决方案受到了众多科学家的青睐。在发光检测领域,Berthold提供了多款高性能的仪器,其中包括LB9510、LB9526和LB963三个型号的发光仪。这些仪器在生物发光和化学发光检测中具有显著的优势和广泛的应用。

板式发光检测仪:Centro LB 963

1.样品形式:基于96孔微孔板化学发光仪,适用于闪光和辉光发光应用。

2.优越的灵敏度:<1.8 zmol萤火虫荧光素酶。

3.出色的超低交叉干扰性能:10^- 6。

4. 宽动态范围:>6个数量级

5.先进的检测器技术:低噪声光子计数光电倍增器(PMT)提供更好的信噪比和更稳定的信号(光子计数PMT被广泛认为是检测发光最灵敏的设备)。

6. 试剂进样:多达3个独立控制的喷注式进样器,在整个进样体积范围可提供最高的精确度和准确度(>98%)。

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管式发光检测仪:Lumat LB 9510

1.样品形式:所有直径12mm的发光管或者1-2ml的离心管,适用于闪光和辉光发光应用。

2.优越的灵敏度:<1 amolATP/管。

3.先进的检测器技术:低噪声光子计数光电倍增器(PMT)提供更好的信噪比和更稳定的信号。

4.试剂进样:多达2个独立控制的喷注式进样器,在整个进样体积范围可提供最高的精确度和准确度(>98%)。

5.便捷的样品切换机制:电机驱动的旋转装置可以装载2个样品管(一个用于检测,另一个用于装卸),在前一个样品在检测的同时可以装载下一个样品。


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单管式化学发光检测仪:Sirius 2 LB 9526

1.样品形式:12mmx75mm的发光管,12mmx55mm的发光管,1.5ml和2ml离心管,35mm培养皿, 20ml液闪管。

2.优越的灵敏度:0.5zmol荧光素酶,1amol ATP。

3.先进的检测器技术:低噪声光子计数光电倍增器(PMT)提供更好的信噪比和更稳定的信号。

4.试剂进样:多达2个独立控制的喷注式进样器,注入量范围为20–500 μL。

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#reference

应用举例

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Centro LB 963

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这篇文章的主要内容是关于在巨噬细胞中新发现的一个调控机制,该机制涉及转录因子EB(TFEB)在调控吞噬体-溶酶体和线粒体之间的相互作用,以及在抗菌防御中的作用。研究发现,TFEB能够激活一个信号通路,即TFEB-Irg1-itaconate信号通路,它通过促进itaconate(一种具有抗菌活性的代谢物)的合成来限制沙门氏菌在巨噬细胞内的生长和存活。这篇文章使用Centro LB 963做了荧光素酶测定实验。实验中使用了携带荧光素酶基因的沙门氏菌,这些细菌被用来感染巨噬细胞。通过测量感染细胞的荧光素酶活性,研究者可以评估沙门氏菌在细胞内的生长和存活状态。通过比较使用TFEB激活剂处理的细胞与对照组的荧光素酶活性,研究者能够确定TFEB激活对沙门氏菌增殖的影响。这项技术使得研究者能够在单个细胞水平上,实时监测和量化细菌的活动,为理解宿主细胞如何控制细菌感染提供了重要信息。

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图1.来自 NanoLuc-ITA-沙门氏菌感染的BMDM(骨髓来源的巨噬细胞)的荧光素酶测量值(左)和在TFEBa处理下,与对照组相比,溶酶体内itaconate水平的增加(右)。这些数据支持了TFEB激活能够增加溶酶体内顺乌头酸水平的观点,这对于理解TFEB在调控巨噬细胞抗菌反应中的作用至关重要。



Lumat LB 9510

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这篇文章的主要内容是研究微RNA-153(miR-153)在低氧条件下对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖和迁移的影响,以及其通过靶向ρ-相关、卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)和活化T细胞核因子细胞质3(NFATc3)发挥作用的机制。研究发现,miR-153能够抑制低氧诱导的PASMCs的增殖和迁移,这为肺动脉高压(PAH)的治疗提供了新的潜在靶点。在这篇文章中,研究人员使用了使用Lumat测量293T细胞共转染miR-153模拟物或模拟对照以及包含野生型或突变型ROCK1 3'-UTR或NFATc3 3'-UTR的质粒后的荧光素酶活性,以验证miR-153与ROCK1或NFATc3的直接相互作用。
图片图2.miR-153 直接靶向 293T 细胞中的 ROCK1 或 NFATc3 的 3'-UTR。(A) ROCK1 3'-UTR 中的一个区域预测与 miR-153 结合。(B) 与模拟 miR-153 或模拟 NC 以及含有 wt ROCK1 3'-UTR 或 mut ROCK1 3'-UTR 的质粒共转染的 293T 细胞中的荧光素酶强度分析。(C) NFATc3 3'-UTR 中的两个区域预测与 miR-153 结合。(D) 与模拟 miR-153 或模拟 NC 以及含有野生型 NFATc3-3'-UTR 或突变型 NFATc-3'-UTR 的质粒共转染的 293T 细胞中的荧光素酶强度分析。数据代表平均值 ± 标准差。n=3。**P<0.01。miR,微小RNA;3'-UTR,3'-非翻译区;ROCK1,ρ相关、卷曲螺旋蛋白激酶1;NFATc3,活化T细胞胞质3的核因子;NC,阴性对照;wt,野生型;mut,突变体。



Sirius 2 LB 9526

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这篇文章的核心内容是研究PD-L1如何通过Smad3和β-连环蛋白信号通路介导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转变,这一过程与特发性肺纤维化(IPF)的发展有关。研究显示PD-L1在IPF患者肺部表达增加,且其敲低能够减轻TGF-β诱导的肌成纤维细胞标记物表达,提示PD-L1可能成为IPF治疗的新靶点。研究人员在进行荧光素酶报告基因检测时,使用了Sirius 2发光仪来测量荧光素酶的活性。这项检测是在原代人肺成纤维细胞(HLFs)中进行的,这些细胞被转染了α-SMA报告质粒和PD-L1 siRNA,随后经过TGF-β处理。通过Sirius 2发光仪测量的荧光素酶活性数据,研究者们能够评估PD-L1对TGF-β诱导的α-SMA基因表达的影响。得到的结论是,PD-L1的敲低能够显著抑制TGF-β诱导的α-SMA启动子活性,这表明PD-L1可能作为Smad3的辅助因子来促进靶基因的表达。

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图3.将α-SMA报告基因载体和对照siRNA(siCtrl)或PD-L1 siRNA共转染到原代正常人肺成纤维细胞中,随后用TGF-β(5 ng/mL)处理额外的12小时,然后测量荧光素酶活性。PD-L1的敲低显著抑制了TGF-β诱导的α-SMA启动子活性。

划重点

   基因有限公司作为德国伯托(Berthold)公司中国区合作伙伴,致力于为您提供专业而全面的服务。我们将持续在“微孔板检测”、“发光检测”、“动物活体检测”、“植物活体检测”等领域为您提供解决方案,提供更多应用咨询及技术支持。如果您想了解更多内容,请联系我们的工作人员吧!

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关于基因

基因有限公司成立于1992年,是一家提供生命科学科研仪器、试剂耗材和技术服务的综合服务商。基于“Gene Brightens Every Life • BioTech Connects the World”——“基因燃亮生命 • 生物技术连接世界”的愿景,专注于生命科学领域前沿技术的引进和推广,致力于推动该领域国内科研机构硬件水平及实验方案的革新与升级。同时,公司也一直致力于自主品牌的科研设备的研发与生产,拥有一系列通用性强、互补性高的自主品牌产品。

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