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这个影响细胞转染的重要因素,怎能忽视?
细胞和基因疗法(Cell and Gene Therapy, CGT)是继小分子、大分子靶向疗法之后的新一代精准疗法,引领着生物制药的新一轮浪潮。
2024年3月13日,专注于生命科学领域的全球性公司IQVIA(艾昆纬)发布了一份有关细胞和基因疗法现状及未来发展趋势的研究报告。
(图片来源:IQVIA官网)
该报告指出,细胞和基因疗法(CGT)为那些缺少其他治疗选择的患者带来了变革性的获益。近年来该领域的投资、临床研究和新产品上市均呈现显著增长的趋势。
据IQVIA报告统计,与10年前相比,细胞和基因疗法领域的交易规模增长了48%,并在生命科学整体交易中的占比逐年攀升。
在2023年,该领域的交易占比已突破10%;而在2014年,这一数字仅为5%。这些数据充分反映了业界对细胞和基因疗法治疗模式的信心与兴趣。
细胞和基因疗法领域交易数目和占所有生命科学交易的比例 在过去10年里显著提升
(图片来源:IQVIA官网)
细胞转染技术在生命科学研究中已有广泛应用,例如基因治疗、基因表达研究和药物开发等。 通过转染,可以实现基因编辑、蛋白表达、信号传导研究等,为揭示细胞机制、开发新药和治疗疾病提供了重要工具。 质粒提取是基因治疗上游研发过程中的重要环节。然而质粒提取过程中常会伴有内毒素的出现,会直接影响后续的细胞转染。 内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖和蛋白复合物,当细菌裂解时会大量释放出来。 内毒素单位为EU。 质粒中内毒素含量的高低常用EU/µg表示。按照EU/µg大小,质粒被分为三个级别: 测序级别(>50EU/µg)、 转染级别(<50EU/µg)、 无内毒素级别(<0.1EU/µg)。 由于内毒素两亲性和负电荷性,性质和DNA类似,因此在质粒纯化过程中会伴随质粒一同被纯化出来。 (图源网络)
内毒素会极大程度的影响转染效率,同时还可能激活免疫细胞的非特异反应,出现假阳性。因此,为了保证高转染率和转染细胞高存活率,必须从质粒制备的过程中将内毒素去除。
NucleoBond® Xtra Midi / Maxi EF
来自有着近百年滤纸技术和近60年色谱技术的德国MN(MACHEREY-NAGEL),采用二代阴离子交换树脂技术和裂解液澄清方式相结合,质粒质量更高! (NucleoBond® Xtra Midi EF Column)
重力过滤和过柱,无需离心,减少了离心力对质粒超螺旋结构的影响。
推荐理由1:内毒素低于 0.1EU/ug DNA
NucleoBond® Endotoxin Free Plasmid DNA kit系列设计有专门的Endo-EF内毒素去除试剂,有效去除内毒素,避免了长时间的氯化铯超速离心步骤,也不需要冰上孵育30min,内毒素含量更低。
推荐理由2:超螺旋结构保护好
滤纸和色谱技术相结合诞生的NucleoBond® Xtra Column实现裂解液重力过滤和过柱,无需离心,减少了离心力对质粒超螺旋结构的影响。
(裂解后的质粒状态(泳道1)和洗脱下来的 质粒状态(泳道4)保持一致。)
推荐理由3:抽提速度更快
NucleoBond® Xtra Column实现过滤以及质粒结合树脂合二为一,避免较长时间的离心。NucleoBond® Finalizer仅需5min即可完成之前长达1h的异丙醇质粒离心沉淀操作。
(NucleoBond® Finalizer)
下面是操作步骤初体验:
一起来看 NucleoBond® Xtra Midi / Maxi EF 对内毒素敏感型真核细胞的 高效转染实例!
Huh-7细胞使用某竞品转染试剂进行转染。NucleoBond® Xtra Midi EF 抽取的质粒转染后的细胞活力和对照组(treatment w/o DNA)转染后的细胞活力相同。 因此, NucleoBond® Xtra Midi EF kit 试剂盒提取的质粒不影响细胞活力。相反,普通分子级质粒抽提试剂盒提取的质粒可以引起细胞活力的降低。
产品信息
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