Western Blot——蛋白免疫印迹，是根据抗原抗体的特异性结合检测细胞或组织样本中的某种蛋白的方法。由于其结合了SDS-PAGE的高分辨力和免疫测定的高特异性和敏感性，被广泛应用于生命科学领域的多种研究中。但WB实验操作繁琐、重复性低、通量小这些问题一直困扰着科研人员。如果有一种方法，不需要提蛋白跑胶转膜，还能把通量提升至384个样品同时做WB；不容易过曝，还能做准确定量，您是否有一丝心动呢？接着往下看吧。

     由LI-COR公司基于近红外成像设备Odyssey上开发的一种在多孔板（96或384 孔板）中进行的细胞内定量免疫荧光测定的方法——In-Cell Western^™，将蛋白质免疫印迹的特异性与ELISA的重复性和高通量相结合。In-Cell Western^™可以让您直接在培养细胞的微孔板中进行多种目标蛋白的相对定量或准确定量的测定。同时，Odyssey搭载着专为处理WB数据而生的Empiria Studio软件（与各大期刊杂志合作研发）协助您在10分钟内完成对整板数据的分析处理。

一实验原理

二实验流程

三优势

In-Cell Western^™助力PROTAC筛选

      2023年发表的文章“The In-Cell Western immunofluorescence assay to monitor PROTAC mediated protein degradation”，详细描述了 In-Cell Western^™在研究蛋白水解嵌合体（PROTAC）功效中的价值。原文表示，相对于普通的WB方法，In-Cell Western^™拥有更高的通量，更简便的方法，同时对于贴壁细胞和悬浮细胞都有很好的适用性。该文通过In-Cell Western^™方法监测PROTAC介导的蛋白质降解，并提供细胞内蛋白水平变化的准确读数。

  靶向蛋白质降解剂在抑制癌症和其他疾病中发挥重要作用。例如PROTAC，包含与目标蛋白的高亲和力配体，该配体与另一配体连接以招募E3连接酶，从而导致多聚泛素化和蛋白降解。文中使用96孔板培养贴壁细胞，然后用合成的化合物作为潜在的降解剂进行处理，随后在微孔板中进行细胞的固定、透化、封闭、一抗孵育、二抗孵育、检测信号，结果如图所示。

图1.不同浓度化合物（浓度从高到低）处理对蛋白PARP1的影响

In-Cell Western^™助力解释胃癌耐药性机制

     “The CAIX inhibitor SLC-0111 exerts anti-cancer activity on gastric cancer cell lines and resensitizes resistant cells to 5-Fluorouracil, taxane-derived, and platinum-based drugs”一文，通过In-Cell Western^™进行了碳酸酐酶IX（CAIX）表达量的测定，确定了WT和耐药胃癌细胞中CAIX的表达情况。研究人员使用不同药物诱导胃癌细胞ASG和ACC-201产生分别对5-Fluorouracil(5-FU)，Paclitaxel(PTX)，Cisplatin (CIS)和FLOT (i.e.Leucovorin, 5-Fluouracil, Docetaxel, and Oxaliplatin)有耐药性的胃癌细胞系。研究结果发现，CAIX高表达的细胞比CAIX低表达的细胞具有更强的药物抗性表型，显示出CAIX与药物抗性之间的联系。此外，在通过CAIX过表达细胞的实验中，CAIX过表达细胞与对照相比，在接受5-FU、PTX、CIS或FLOT治疗后，其增殖抑制和凋亡水平均较低。换句话说，该研究利用In-Cell Western^™技术揭示了CAIX在GC药物抗性中的作用和机制。

图2.In-Cell Western^™对WT、5-FUr、PTXr、CISr 和 FLOTr AGS 和ACC-201 细胞中的总 CAIX 表达分析结果

In-Cell Western^™助力胰岛素药筛

     自胰岛素作为治疗药物以来，检测胰岛素及胰岛素类似物的生物活性常用和标准方法是基于动物水平的兔血糖测定法，但这种方法相对而言过程更复杂，更耗时，花费更大。为解决以上问题，美国胰岛素药典官方推荐了另一种检测方法---Odyssey In-Cell Western^™技术，这种方法灵敏度更高，结果更精确，通量更高，重复性更好。