自定义法检测血红蛋白，让你见识NanoDrop的科技

技术交流

扫描二维码
或添加“GeneGroup003”
获取更多更新资讯

商城订购

扫描二维码
或添加“基因商城（GeneMart）”
手机下单，快人一步

售后服务

扫描二维码
或添加“GeneGroup005”
获取更快速售后支持

自定义法检测血红蛋白，让你见识NanoDrop的科技

2024-01-26

NanoDrop自定义检测模式

Thermo Scientific™ NanoDrop™超微量分光光度计可使用1-2 μL的样品可靠地测量核酸和蛋白质。然而，NanoDrop™超微量分光光度计也可用于许多其他应用。本篇文章讨论了NanoDrop One/One^C超微量分光光度计如何使用自定义方法测量血红蛋白。

NanoDrop血红蛋白检测

血红蛋白检测原理

血红蛋白是一种存在于红细胞中的四聚体蛋白，可以可逆地结合氧气。NanoDrop™超微量紫外-可见光分光光度计可以利用合适的消光系数和吸光度峰值来定量各种形式的血红蛋白。

氧合血红蛋白含有结合氧，在 414 nm、541 nm 和 576 nm 处显示吸光度峰。

脱氧血红蛋白不含结合氧，在 431 nm 处显示吸光度峰。

高铁血红蛋白由于含有Fe³⁺而不能结合氧，在 406 nm 处显示吸光度峰。

此外，溶血会影响许多实验分析的准确性。NanoDrop™超微量分光光度计测量样品在414nm处的吸光度，可用于评估血浆或血清样品是否发生溶血。游离氧合血红蛋白的增加会导致414nm处的吸光度升高。这一特性使得NanoDrop™在检测溶血情况方面成为一种可靠的工具，为实验数据的准确性提供了重要的参考。

血红蛋白检测方法

在NanoDrop One/One^CPC端控制软件上建立创建一种自定义方法，用于测量血红蛋白在 406、414、431、541 和 576 nm（区分氧合血红蛋白、脱氧血红蛋白和高铁血红蛋白所需的五个波长）处的吸光度。也可在NanoDrop主页的软件部分下载定制的碳氧-血红蛋白检测方法。

血红蛋白检测结果

在NanoDrop One/One^C上测量高铁血红蛋白的典型吸光度光谱，峰值在406nm处。在541nm和576nm处没有氧合血红蛋白的峰。NanoDrop One/One^C可准确的检测出各种形式的血红蛋白。

图1.NanoDrop One/One^C高铁血红蛋白检测界面

每种溶液5次重复的标准偏差范围为0.015-0.552A。各溶液的变异系数为0.61 ~ 2.79%。检测结果显示了NanoDrop One/One^C超微量分光光度计高度的准确性和重复性。

表1.血红蛋白原液浓度为8mg /mL，然后进行连续稀释，形成4mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、0.5 mg/mL、0.25 mg/mL和0.125 mg/mL的标准品，每个标准品重复检测5次。血红蛋白原液由MP Biomedicals提供。

►►►

总结一下

本应用描述的血红蛋白定制方法可用于测定氧合血红蛋白和脱氧血红蛋白浓度。根据不同的实验需要，可以使用该方法来监视414 nm吸光度测定样品是否溶血。如果测量氧合血红蛋白，该方法可用于监测541 nm和576 nm处的吸光度。如果测量高铁血红蛋白，该方法也可用于监测406 nm处的吸光度。

参考文献：

1. Peter J. Kennelly, PhD & Victor W. Rodwell, PhD, in Harper’s Illustrated Biochemistry(McGraw-Hill Companies, Inc, 29th Edition., 2012), pp. 48–55.

2. Trefor Higgins, M.Sc., John H. Eckfeldt, M.D., Ph.D., James C. Barton, M.D., Basil T. Doumas, Ph.D., in Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics(Elsevier Saunders, Fifth Edition., 2012), pp. 985–988.

3. M. B. Kirschner et al., Haemolysis during Sample Preparation Alters microRNA Content of Plasma. PLOS ONE. 6, e24145 (2011).

4. E. J. van Kampen, W. G. Zijlstra, in Advances in Clinical Chemistry, A. L. Latner, M. K. Schwartz, Eds. (Elsevier, 1983, S0065242308604011), vol. 23, pp. 199–257.

5. S. O. Sowemimo-Coker, Red blood cell hemolysis during processing. Transfus. Med. Rev. 16, 46–60 (2002).

6. J. S. Shah, P. S. Soon, D. J. Marsh, Comparison of Methodologies to Detect Low Levels of Hemolysis in Serum for Accurate Assessment of Serum microRNAs. PLOS ONE. 11, e0153200 (2016).

7. Optical Absorption of Hemoglobin, (available at http://omlc.org/spectra/hemoglobin/index.html).

关于我们

基因与Thermo

基因有限公司自2004年成为NanoDrop Technologies公司（2007年被Thermo Fisher Scientific公司并购）在中国区的合作伙伴，至今已有近20年的合作历史，负责NanoDrop全系列产品线的售前咨询、售后安装、应用培训和维修维护等服务。目前在中国有数万台装机，服务了几十万用户。

联系下方产品专员进行试用吧！

关于基因

基因有限公司成立于1992年，是一家提供生命科学科研仪器、试剂耗材和技术服务的综合服务商。基于“Gene Brightens Every Life • BioTech Connects the World”——“基因燃亮生命 • 生物技术连接世界”的愿景，专注于生命科学领域前沿技术的引进和推广，致力于推动该领域国内科研机构硬件水平及实验方案的革新与升级。同时，公司也一直致力于自主品牌的科研设备的研发与生产，拥有一系列通用性强、互补性高的自主品牌产品。

基因的服务网络遍及全国各地十多个大中城市，拥有包括仪器销售，试剂销售，市场与技术支持，维修，客服，物流等多个部门组成的完整服务体系。

我们希望通过不懈努力，为您的成功铺路搭桥，也为中国的生命科学事业赶超世界先进水平尽一己之力。欲了解更多信息，请访问www.genecompany.cn。