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抗体筛选——单细胞测序前样本处理
抗体药物是生物制药领域的重要组成部分，目前美国 FDA 批准上市的抗体药物已超过百种，用于治疗多种人类疾病。自2014年以来美国 FDA 或欧洲 EMA 每年批准6-13种抗体药物。由于癌症或其他疾病的复杂性，通常需要药物通过多种机制发挥作用。 随着未单抗更多的免疫调节功能被发现，它们的治疗潜力有望继续增长。近些年，基于单克隆抗体和小分子偶联的ADC药物也开始快速推进至商业化，甚至出现包括多肽和其他药物分子也与（MAbs）偶联的”XDC“。而这些药物的基础之一都是要获得大量的高纯度高特异性的单克隆抗体。 随着日益增大的抗体药物需求，抗体筛选技术的发展也是日新月异，目前应用较普遍的常规技术包括： 杂交瘤技术 抗体文库筛选技术 B细胞克隆技术 在单细胞或者极少细胞水平上快速获得克隆序列，进行杂交瘤测序或者B细胞测序对于快速筛选有功效的抗体分子至关重要。（Cell—RNA—cDNA）。 NEB可为您提供解决方案！ Cell—RNA样品准备 NEBNext® Single Cell Lysis Module模块（#E5530） NEBNext® Single Cell Lysis Module模块（#E5530）包含NEBNext®细胞裂解缓冲液和小鼠RNase抑制剂，可以用于NEBNext单细胞/低输入RNA库准备工作流程中优化的细胞裂解和储存。可用于单细胞裂解阶段。 RNA-cDNA样品准备 Template Switching RT Enzyme Mix（#M0466） Template Switching RT Enzyme Mix模板置换反转录酶和其相应的反应缓冲液能够在反转录反应中有效地实现模板置换。混合液中含有独特的反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂。与竞争对手的反转录酶产品不同，NEB 的产品不需要添加任何添加剂（如 PEG 或甜菜碱）来优化性能，从而简化了反应建立流程。与模板置换寡核苷酸（TSO）搭配使用， 合成的 cDNA 3’端可以选择性地加入已知序列。由此获得的 cDNA 可进行 PCR 扩增，也可作为 5’RACE（ cDNA 末端快速扩增）或第二链 cDNA 合成的模板。 特性 以极低起始量模板（单细胞/细胞核或 2 pg 总 RNA）制备 RNA-seq 文库 以最低起始量为 10 ng 的总 RNA 进行 5'RACE 降低 RNA-seq 或 5'RACE 的背景 该酶混合液包含小鼠 RNase 抑制剂，不需要额外添加 兼容各种模板置换寡核苷酸（TSOs）、反转录引物和 DNA 聚合酶,用于扩增全长 cDNA 与其他的 RNA-seq 方法（例如:Smart-Seq®）相比，操作更快捷 Template Switching RT Enzyme Mix在 5’RACE 的实验中操作简单,性能优异 A.模板置换介导的 5’RACE 概述。在模板置换反转录反应后，用反向基因特异性引物和正向 TSO 特异性引物进行 5'RACE PCR。 B.使用 NEB 模板置换反转录酶混合液 5'RACE 方案（左）或 Clontech SMARTer 5'/3'RACE 试剂盒（右）对多种 RNA 靶标的 5'RACE 产物进行琼脂糖凝胶分析。加入 1 μg 的 Jurkat 总 RNA，10 pg 的 8 kb 合成 RNA 和 10 ng 的 ERCC RNA Mix 1，用于评估作为转录物长度和拷贝数的性能。在 NEB 的反应中，反转录引物为 oligo (dT)40 VN，TSO 为 GCTAATCATTGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACATrGrGrG，TSO 中特异性 PCR 引物用下划线标注。两种方法使用相同的基因特异性 PCR 引物。靶标名称和预期片段长度如图所示。 基因有限公司 作为NEB的全国一级代理，可为您提供分子、核酸方面的解决方案。 如有问题或需求，欢迎扫码添加NEB产品经理进行咨询！
