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Agilent BioTek多功能酶标仪助力钙离子流检测
细胞是生命科学中最基本的单位，其中的各种信号传递和调节过程对于我们理解生物学的奥秘至关重要。而钙离子作为细胞内最重要的信号分子之一，对于细胞功能的调控起着至关重要的作用，涵盖了细胞信号传导、神经传递、细胞周期调控、肌肉收缩、细胞凋亡等方面。深入研究细胞内钙信号的作用和调控机制对于我们理解生物学的基本原理以及疾病的预防和治疗具有重要意义。
Agilent BioTek解决方案
Agilent BioTek是全球专业微孔板检测仪器制造商，其高性能的多功能酶标仪在检测钙离子方面具有以下特点：
1.高灵敏度：Agilent BioTek多功能酶标仪具备高灵敏度的检测能力，能够准确捕捉细胞内微弱的钙离子信号变化。
2.自动化操作：该仪器提供了自动化的样品加载和处理功能，大大简化了实验操作流程，提高了实验效率。
3.实时监测和数据记录：Agilent BioTek多功能酶标仪能够实时监测和记录钙离子信号的变化过程，为研究人员提供了准确的数据和分析结果。
4.数据分析软件：该仪器配备了强大的数据分析软件Gen5，能够对测量到的荧光信号进行处理和分析，帮助研究人员深入理解钙离子的动态调控过程。
钙离子流的检测，反应迅速，时间短暂，信号捕获窗口较小，手工加样往往无法实现加样后即刻进行检测，因此无法完全捕获离子流信号变化的过程。Agilent BioTek的多功能酶标仪可搭载双自动加样器，如下图所示，加样后即刻进行信号捕获，无论是定量的荧光强度，还是每个细胞内的信号快速变化，都可以准确呈现。同时可以搭载独特的环境控制装置提供长时间的孵育条件，从而满足多种实验方案的检测需求。
图1.Agilent BioTek双自动进样器
Agilent BioTek可以提供高通量多模式自动化的检测仪器，实现多种基于微孔板检测的实验，搭配完全开放的试剂为细胞内钙离子的检测提供全面的检测方案。
方案一：酶标法-荧光模式检测
例如，Fluo-3-Am是一种新型的高度特异性钙离子荧光指示剂，可以灵敏地反映细胞内游离钙离子浓度的变化，Fluo-3-Am进入细胞后经非特异性酯酶脱去Am酯，成为脂溶的Fluo-3留在细胞内，当Fluo-3与细胞内游离钙结合后，其荧光强度是Fluo-3本身的40倍以上，当用480nm波长激发时，其荧光强度与游离钙离子浓度成正比。
方案二：酶标法-发光模式检测
例如，使用高度钙敏感和膜通透的腔肠素类似物作为载脂蛋白基因转染细胞的钙指示剂。水母发光蛋白是来自维多利亚水母的钙敏感生物发光蛋白，已广泛用作细胞中的钙指示剂。当与钙离子结合时，水母发光蛋白复合物发出蓝光。发光强度与Ca2+浓度成正比。
方案三：酶标法-吸收光模式检测
例如，某试剂盒中钙离子浓度由钙离子和邻甲酚酞之间形成的生色复合物决定，其在575nm处进行测量并与存在的钙离子浓度成比例。可借此测定钙离子浓度变化。
今年六月发表在Life Science上的Agomelatine inhibits platelet aggregation through melatonin receptor-dependent and independent mechanisms一文，利用Agilent BioTek Synergy H1多功能酶标仪进行了钙离子的检测。这篇文献研究了抗抑郁药物阿戈美拉汀（Ago）对血小板聚集和粘附的影响。Ago可以抑制由花生四烯酸（AA）和胶原引起的人类血小板聚集。Ago还降低了AA引起的血小板内血栓素B2（TxB2）生成，以及细胞内钙离子水平和P-选择素在细胞膜上的表达。使用Fura2-AM等荧光钙探针，将其与血小板样本共同孵育，然后通过荧光分析仪测量荧光信号的变化。荧光探针与细胞内钙离子结合后会发出荧光信号，通过测量荧光强度的变化可以反映细胞内钙离子水平的变化。在实验中，使用不同的刺激物（如阿拉奇酸或胶原蛋白）来诱导细胞内钙离子的释放，然后观察荧光信号的变化来评估细胞内钙离子水平的变化。
图2.MT1/MT2 激活可降低人血小板中的血小板内钙水平。含有 FURA2M 的血小板样品与 10 μM luzindole (Luz) 预孵育。然后将样品暴露于 10 μM UCM871（A；n = 7）或 50 μM UCM924（B；n = 7），后用 300 μM 花生四烯酸 (AA) 刺激。将另外一组含有FURA2M 的血小板与 10 μM luzindole 一起预孵育。然后将样品暴露于 50 μM UCM871（C；n = 7）或 100 μM UCM924（D；n = 7），用 3 μg/ml 胶原蛋白（Col）刺激。此后测量血小板荧光以计算血小板内钙水平。
图3.Agilent BioTek Synergy H1多功能酶标仪
Agilent BioTek多功能酶标仪在钙流检测中具有广泛的应用领域，包括但不限于以下几个方面：
1.细胞信号传递研究：通过监测和测量细胞内钙离子的浓度变化，可以深入研究细胞信号传递的机制。Agilent Biotek多功能酶标仪能够实时记录钙离子信号的变化过程，帮助研究人员揭示细胞内信号通路的动态调节过程。
2.神经科学研究：神经细胞中钙离子的入侵和释放与神经传导和突触传递密切相关。Agilent BioTek多功能酶标仪可以提供高灵敏度的钙流检测，帮助研究人员深入研究神经细胞内钙信号的时空分布特征和与神经功能相关的机制。
3.药物筛选研究：钙离子通道是许多药物的重要靶点之一。Agilent BioTek多功能酶标仪可以用于药物对钙离子通道的影响进行研究，从而发现新的药物靶点和药物治疗策略。
4.细胞毒性研究：某些毒性物质会引起细胞内钙离子的异常释放和调控，导致细胞功能的紊乱。通过使用Agilent BioTek多功能酶标仪进行钙流检测，可以对毒性物质的作用机制进行深入研究，为毒理学研究提供重要的实验手段。
图4. Agilent BioTek多功能酶标仪家族
