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垂直电泳中的小问题常见Q&A
科研人
基因人，基因人，上次你发给我关于水平电泳中遇到的问题和解决方案，可以再发我一下吗？
可以关注“基因快讯”搜索历史文章"水平电泳中的小问题常见Q&A"哦，或者直接访问超链接。
基因人
科研人
谢谢哒，帮大忙了，我正拿不准配置多少浓度的凝胶。
这次可以讲讲垂直电泳吗？原理啥的都还给老师了
不客气哦。那我们就一起温故而知新吧!
基因人
什么是垂直电泳？
垂直电泳相对于水平电泳，使用的电泳支持物垂直放置，通常将垂直电泳等同于聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE），因其网状结构起到分子筛效应，用于分离蛋白质和寡糖核苷酸。按是否在配方中加入十二烷基磺酸钠（SDS），可将PAGE电泳分为非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）。
SDS-PAGE电泳有什么特点？
待分离蛋白质样品在电泳中的泳动速度，或相对迁移率与蛋白质本身性质（如分子大小）、凝胶孔径和电泳条件（如电流、电压）等密切相关，蛋白质结合大量SDS后，各组分之间的形状和电荷差异被抵消，此时蛋白质在电场中泳动速度的快慢，仅与各自分子量的大小有关。
蛋白质变性使亚基聚合形式存在的蛋白质解聚成单个亚基。因此，对于一个纯化蛋白质，可经SDS-PAGE确定其亚基种类、数目及大小。
SDS-PAGE具有电荷效应、浓缩效应和分子筛效应，从而使蛋白质达到高分辨率的分离效果。
SDS-PAGE电泳各成分对电泳的影响？
丙烯酰胺（Aery）单体及N,N-亚甲基双丙烯酰胺（Bis）的含量及比例决定了凝胶孔径的大小，影响电泳速度和分离效果。凝胶聚合过程中，Acry单体之间形成延伸的多聚链，并通过Bis的作用，连接和交叉成网状结构，最终成为肉眼可见的凝胶。
催化剂过硫酸钠（APS）和加速剂四甲基乙二胺（TEMED）直接影响凝胶聚合质量。二者加量过多，会使Acry单体聚合链较短，聚合不充分，胶的脆性增加；反之，如加量过少，则聚合速度大大降低，甚至只出现所配置的胶溶液黏度稍增加、无胶状物出现的现象。
Tris缓冲液的pH值对于电泳效果起到至关重要的作用。在SDS-PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris-HCl缓冲系统，浓缩胶是pH 6.7，分离胶pH 8.9；而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离少，在电场作用小，泳动效率低；而氯离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于两者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压梯度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后，由于胶中pH呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据分子大小进行分离。
如何提高垂直电泳的分辨率？
保证聚丙烯酰胺充分聚合，可提高凝胶的分辨率。配置凝胶在室温凝固后，可在室温放置一段时间使用。忌即配即用或4度冰箱放置，前者易导致凝固不充分，后者可导致SDS结晶。
根据待测蛋白的分子量大小，配置合适浓度的凝胶，可参考下图。
使用长胶电泳效果更好，使较大分子量的蛋白质也能实现更好地分离。
垂直电泳常见问题和解决方案
北京百晶生物技术有限公司是香港基因集团下属子公司，专注于生命科学领域的仪器研发、生产和销售。多种规格垂直电泳仪，转印电泳仪，电泳电源和多功能成像系统等，帮助解决垂直电泳/Western Blot检测中遇到的各种小问题。
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