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干货 | 蛋白Marker使用注意事项和常见问题答疑
一、GeneTech 三色预染蛋白Marker简介 中文名称：预染蛋白标准品 GeneTech 三色预染蛋白Marker订购信息 二、使用方法
英文名称：Prestained Protein Ladder
分子量范围：10-180 KDa
条带数量：10条
条带颜色：橙、绿、蓝
成像方式：目测比色、近红外 (NIR) 荧光（700 nm通道，蓝色条带）、RGB 荧光（550 nm通道，橙色条带）
推荐的凝胶体系：所有 SDS-PAGE 凝胶
产品用途：
1、监测SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳期间蛋白的迁移；
2、监测Western blot 蛋白转移到膜上的情况；
3、测定SDS 聚丙烯酰胺凝胶和Western blot 上的蛋白分子量。
在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的使用方法：
1. 在室温下解冻蛋白marker；不要煮蛋白marker。
2. 轻轻并彻底Vortex管子，以确保溶液充分混匀。
3. 将适当体积的蛋白marker加到凝胶上。
使用量建议：
• Mini-gel: 0.75-1.0mm厚的胶，上样5μL /孔，或 1.5mm厚胶，上样10μL /孔；
• Large gel: 0.75-1.0mm厚的胶，上样10μL /孔，或1.5mm厚胶，上样20μL /孔。
4. 将未使用的蛋白marker放回-20°C保存，可保存长达一年，或4°C保存可达3个月。
三、使用建议/ 注意事项 如下是对于此预染marker的一些使用建议和注意事项，供参考： 1. 由于marker中含有SDS，其在低温下易析出，因此marker在上样前，需要在室温进行回温（如20-25度回温5-10分钟），并在上样前要充分混匀（如用Vortex混匀）；避免低温操作，可有效减少异常条带的出现。 2. 切勿煮沸或高温孵育预染marker，导致标准品中的蛋白质降解。 3. 上样时使用无蛋白酶的吸头（如高压灭菌过的吸头）进行上样，避免外源引入蛋白酶造成marker降解。 4. 上样时每次换新的枪头，避免反复使用同一支Tip，以免造成污染。 另外，如果实验室太多人同时使用一管蛋白Marker, 因为每个人的使用习惯无法控制，建议可以先分成小管，就不会一次污染一整管造成浪费。 5. 在低浓度凝胶(< 10%)中，marker中的低分子量蛋白可能随染料往前端迁移。 6. 进行Western blotting时，Marker中的大蛋白(> 100K)可能需要更长的转膜时间或更高的转膜电压。
四、常见问题解答
1 为何有时有些条带会消失不见？ 或Marker蛋白高分子量跑着跑着不见了？
答：可以从以下几方面查找原因： 1、很有可能是蛋白marker遭到蛋白酶污染而造成降解：可能是跑胶缓冲液遭受蛋白酶（proteinase）污染，或是buffer 重复使用太多次，导致长菌以致于有蛋白酶存在，或是上样时反复使用同一支Tip。 解决办法：（1）上样时避免反复使用同一支Tip。 （2）内槽使用新鲜配置的跑胶缓冲液。 （3）如前面建议，如果实验室太多人同时使用一管蛋白Marker, 因为每个人的使用习惯无法控制，建议可以先分成小管，就不会一次污染一整管造成浪费。
2、检查所用凝胶的类型/百分比，凝胶浓度过低可能会导致小分子量条带不能很好分散；反之，则可能会导致高分子量条带不好分散。 凝胶电泳体系的影响排查：如需要排查是marker的原因还是电泳体系的影响，建议可以在同一块胶上进行对比测试，在同一块胶上电泳疑似问题产品和正常产品，看条带是否有差异，以排除凝胶电泳系统的影响。
3、检查蛋白质标准品的有效期，过期产品可能出现褪色或缺失条带。
4、检查蛋白质标准品的储存条件，储存条件不当也会影响标准品中蛋白质的稳定性。
5、确保蛋白质标准品在装入凝胶前未加热/煮沸，该款蛋白Marker为即用型，加热/煮沸可能会导致标准品中的蛋白质降解。
6、如遇胶上有、而转膜后消失的话，请检查转膜后滤纸上是否有相应marker条带并调整转印条件。
2 该款蛋白Marker中是否含有动物源成分？
答：该蛋白Marker 是由重组蛋白组成，并不含有任何动物成分。
3 该款蛋白Marker可以用来准确预估 蛋白分子量大小吗？
答：不可以。因为该款Marker为预染Marker，每个蛋白质均共价结合有染料，这些染料可能会导致Marker中蛋白在不同缓冲系统（即不同凝胶）中不同地迁移速率。因此预染Marker 只能预估蛋白质的表观分子量，如需准确预估，建议使用未预染Marker。
4 该款蛋白Marker 可以用来对样品定量吗？
答：不可以。这款Marker 并不是为此设计，如需定量，还是建议使用更准确蛋白定量试剂盒。
如有任何其他问题，欢迎联系咨询如下产品专员
