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全力以赴,与AFA聚焦超声技术共同攻克蛋白质组学研究中样本处理难关(一)
Covaris自动聚焦超声技术(Adaptive Focused Acoustics,AFA)提供了一种自动化、标准化、高通量的质谱分析前样本制备方案。无论是细胞、新鲜组织还是FFPE(福尔马林石蜡包埋)组织样本,基于AFA技术处理样本不仅可以节约时间,还可以提高富集的多肽/蛋白质的得率和种类,使具有低起始量特点的临床样本或者其他类型的样本进行蛋白质组学分析成为可能。 在蛋白质组学分析中,研究人员的目的是想从样本中获得客观真实的多肽/蛋白质以便发现科学问题。一般会使用分辨率灵敏度均较高的质谱仪进行分析,再拿到数据结果。大多数情况下,研究人员已经意识到质谱分析系统性能的重要性,但并未认识到上游实验中蛋白样本获取的重要性。在质谱前样本处理过程中如何以较少的处理时间获得更多得率和种类的多肽/蛋白质?对于这个问题的深入探究往往是不够的且是必要的。
在以往的推文中我们已经对一些典型的案例进行了详细介绍,现整理如下,方便大家进行系统性查阅。
低起始样本量—组织/细胞样本的处理: 样本量低至1mg的人、小鼠来源的肝脏新鲜/FFPE样本的提取方案和数据解析 ➡Covaris ML230 聚焦超声系统---轻松实现自动化临床样本蛋白质提取 AFA技术结合MMI激光显微切割技术—实现样本量低至单个细胞的定量蛋白组学分析 自动化、标准化、高通量: 以人类腺瘤FFPE样本为例详细介绍了基于AFA技术实现高通量(支持96孔板)样本脱蜡和蛋白纯化的方案 ➡【方法推荐】APAC法—为蛋白组学提供直接、可重复且无毒的FFPE样品制备方案 以恶性周围神经鞘瘤、黑色素瘤和滑膜肉瘤FFPE样本为例详细介绍了基于AFA结合S-Trap纯化方法突破传统二甲苯-乙醇处理方法的局限,通过蛋白质组学分析手段探究肿瘤FFPE样本中新的免疫组化(IHC)标记物。 ➡基于AFA+S-Trap的FFPE样本处理方案突破传统方法局限,大幅提升蛋白组学数据的质量和价值 AFA技术结合顺磁珠蛋白提取方法-SP3(single-pot, solid-phase-enhanced sample preparation)实现质谱前蛋白提取、还原、烷基化、蛋白质纯化、消化和肽回收整个过程的全自动处理方案,整体方案中手动时间不超过5分钟,其中AFA处理96个样本仅仅使用了1小时。 获得蛋白质组学领域著名科学家的青睐 马克斯-普朗克生物化学研究所所长Matthias Mann教授对AFA技术的评价 结合以上推文的详细介绍,不难看出,AFA技术替代/结合传统的去污剂的方法,处理新鲜组织/细胞样本以及FFPE组织样本的脱蜡处理、蛋白质提取步骤中起到关键性作用,提高多种类型样本的多肽/蛋白质的提取率和种类。 那么AFA技术只在这些步骤中起作用吗?当然不止,那让我们期待下一次的推文介绍——全力以赴,与Covaris 聚焦超声技术共同攻克蛋白质组学研究中样本处理难关(二):本推文将详细介绍AFA技术辅助酶切步骤提高多肽/蛋白质得率的具体表现。 如果您急迫的想要获得AFA聚焦超声技术在质谱前样本处理的整体方案或者想要定制适合您样本类型的处理方案,请添加下方技术专家的微信或者联系您身边的基因人。
基因有限公司作为Covaris公司在中国的合作伙伴和授权代理商,为您提供完整的DNA 片段化、ChIP实验、FFPE样本核酸提取、蛋白提取解决方案等。基因有限公司的宗旨是“专才为专家服务”,有专业团队为各大科研机构提供安装培训,技术支持,应用培训与售后维护一条龙服务,赢得客户的一致好评与信任。想要了解更多,请关注我们的官方微信“基因快讯”或联系您身边的基因有限公司员工。