传统多重荧光免疫组化是指基于酪胺信号放大(TSA)技术,可实现在同一组织切片上多个靶标蛋白共同染色,通过荧光图像分析挖掘组织微环境中的复杂信息。
虽然TSA技术可以实现多个靶标蛋白共同染色,但是同时TSA技术却也存在着很多弊端:
耗时的优化过程;
测试的每种抗体都需要进行滴定,
抗体的顺序需要优化,
每次更换Panel时,都需要重新优化;
方案耗时,每种抗体单独添加,通常需孵育过夜;
多轮抗体孵育,可能造成表位丢失和组织降解;
酪氨酸沉积:抗原表位附近的酪氨酸可能耗尽,已经结合的TSA也可能抑制后一轮染色的信号沉积
针对TSA技术的上述弊端,Cell Signaling Technology(CST) SignalStar提供了很好的解决方案:
SignalStar检测的优势:
优化过的实验方案 - 开箱即用;
试剂和方案已经过优化,可与我们的抗体配合使用,我们的抗体可以按任何顺序使用,
构建新Panel时无需重新优化 - 开箱即用;
所有抗体一次性添加,2 天内仅需 6 小时即可进行 8 重染色;
无需多轮抗体孵育!温和去除前一轮染色结合的荧光寡核苷酸,进行后一轮成像;
不是沉积检测 - 荧光寡核苷酸不会导致空间拥挤或表位遮蔽。
SignalStarTM Multiplex IHC试剂盒
SignalStarTM 是使用带有寡核苷酸标签的特异性抗体,结合独有的信号放大系统并使用荧光成像检测的多重免疫组化(mIHC) 技术
可在FFPE样本中同时检测3-8个靶标蛋白
兼容下游不同成像平台以及分析软件
SignalStarTM Multiplex IHC试剂盒包含:SignalStar™ Oligo-Antibody Pair
SignalStar Miniplex Buffer Kit 或者 SignalStar Midplex Buffer Kit
实验流程:
将CST寡核苷酸偶联的抗体加入到经过脱蜡,复水以及抗原修复处理的FFPE组织中
一次添加所有抗体,然后进行温和固定
互补寡核苷酸与前4个抗体的偶联标签杂交
使用荧光寡核苷酸产生并放大信号(AF488, AF594, AF647, AF750)
寡核苷酸连接
寡核苷酸特异性酶去除所有荧光信号
互补寡核苷酸与偶联抗体上的寡核苷酸标签进行第二轮杂交
使用荧光寡核苷酸产生并放大信号(AF488, AF594, AF647, AF750)
寡核苷酸连接
SignalStarTM 验证数据
SignalStar™ 具有良好的灵活性和可重复性
SignalStar™ mIHC 验证并确认靶标定位
SignalStar™ 信号放大系统拥有更大的动态范围
基因有限公司
基因有限公司作为Cell Signaling Technology (CST) 优质一级代理商,为您实验提供更优的支持和帮助。
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