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RNA提取不用慌,基因来帮忙!快收下这份好物清单!
核酸纯化是分子生物学的基础,纯化产物质量的高低会直接影响下游实验的最终结果。 想必每一个初入实验室的科研小白都曾经历过核酸提取和纯化的各种挑战,结果还总是差强人意,让人心情无比emo。 但其实只要选择了合适的实验方法,就能拥有事半功倍的效果。
目前,离心柱法纯化核酸是较为广泛使用的一种方法,其便捷、快速和高产量的特点深受科研人员的喜爱。
01 离心柱法纯化核酸的 「原理」
核酸表面水分子结构薄膜在高盐环境下会遭到破坏,从而吸附在离心柱上,而蛋白等其他杂质会被离心沉淀的原理,通过洗脱从而达到核酸分离纯化的效果。
步骤一般分为: 裂解,结合,洗涤,洗脱 四个步骤,
1.裂解:破坏组织,细胞等,将核酸释放出来。 2.结合:在高盐环境下,核酸结合到离心柱上。 3.洗涤:利用缓冲液,洗涤并离心沉淀杂质。 4.洗脱:通过洗脱液将核酸从吸附膜上脱离下来获得纯化后的核酸。
02 离心柱法纯化核酸的 「优势」
离心柱法与有机法,磁珠法,都有各自独特的优势,也因此在不同应用领域发挥重要的作用。
和有机法相比,离心柱法更加便捷,高效,其纯化产物的得率也会高于有机法。
更重要的是通过对试剂盒缓冲液及吸附膜的优化,离心柱法更能应对多种样本类型,例如:血液,培养液,植物,拭子,病毒,细菌等。针对不同应用,可以纯化某一类特定的核酸,例如质粒,mRNA,MicroRNA 等。
和磁珠法相比,离心柱法提取的核酸纯度更高。能够让高质量的核酸纯化以高性价比的方式进入每一个分子生物学实验室。
(磁珠法提取核酸过程 图源网络)
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